గియార్డియా డ్యూడెనమ్ అనేది పరాన్నజీవి, ఇది గియార్డియాసిస్‌కు కారణమవుతుంది, ఇది అతిసారం యొక్క క్లినికల్ సంకేతాలతో చిన్న పిల్లలలో ముఖ్యంగా సాధారణమైన పేగు సంక్రమణం.ఎక్స్‌ట్రాసెల్యులర్ జి. డ్యూడెనాలిస్ కణాంతర ఒలిగోమెరైజేషన్-లాంటి రిసెప్టర్ 3 (NLRP3) బైండింగ్ న్యూక్లియోటైడ్‌ల క్రియాశీలతను ప్రేరేపిస్తుందని మరియు ఎక్స్‌ట్రాసెల్యులర్ వెసికిల్ (EV) స్రావం ద్వారా హోస్ట్ ఇన్‌ఫ్లమేటరీ ప్రతిస్పందనలను నియంత్రిస్తుందని మేము గతంలో నివేదించాము.అయినప్పటికీ, ఈ ప్రక్రియలో పాల్గొన్న వ్యాధికారక-అనుబంధ డ్యూడెనోకాకల్ EV (GEV) యొక్క ఖచ్చితమైన పరమాణు నమూనాలు మరియు గియార్డియాసిస్‌లో NLRP3 ఇన్ఫ్లమేసమ్ పాత్ర స్పష్టంగా తెలియవలసి ఉంది.
GEVలోని రీకాంబినెంట్ యూకారియోటిక్ ఎక్స్‌ప్రెషన్ ప్లాస్మిడ్‌లు pcDNA3.1(+)-ఆల్ఫా-2 మరియు ఆల్ఫా-7.3 గియార్డిన్‌లు నిర్మించబడ్డాయి, మౌస్ ప్రైమరీ పెరిటోనియల్ మాక్రోఫేజ్‌లుగా బదిలీ చేయబడ్డాయి మరియు ఇన్ఫ్లమేషన్ టార్గెట్ మాలిక్యూల్ కాస్‌పేస్-1ని కొలవడం ద్వారా కనుగొనబడ్డాయి.p20 వ్యక్తీకరణ స్థాయి ప్రదర్శించబడింది..G. డ్యూడెనాలిస్ ఆల్ఫా-2 మరియు ఆల్ఫా-7.3 గియార్డిన్‌లు వాస్తవానికి NLRP3 ఇన్‌ఫ్లమేసమ్ (NLRP3, ప్రో-ఇంటర్‌లుకిన్-1 బీటా [IL-1β], ప్రో-కాస్‌పేస్-1 మరియు కాస్‌పేస్-1 p20), IL స్రావాన్ని కొలవడం ద్వారా గుర్తించబడ్డాయి.1β స్థాయిలు, అపోప్టోటిక్ మచ్చల ప్రోటీన్ (ASC) ఒలిగోమెరైజేషన్ స్థాయిలు మరియు NLRP3 మరియు ASC యొక్క ఇమ్యునోఫ్లోరోసెంట్ స్థానికీకరణ.G. డ్యూడెనాలిస్ యొక్క వ్యాధికారకతలో NLRP3 ఇన్ఫ్లమేసమ్ పాత్రను ఎలుకలను ఉపయోగించి అంచనా వేయబడింది, దీనిలో NLRP3 క్రియాశీలత నిరోధించబడింది (NLRP3 నిరోధించబడిన ఎలుకలు) మరియు శరీర బరువు, డ్యూడెనల్ పరాన్నజీవి లోడ్ మరియు ఆంత్రమూల కణజాలంలో రోగలక్షణ మార్పులు పర్యవేక్షించబడ్డాయి.అదనంగా, NLRP3 ఇన్‌ఫ్లమేసమ్ ద్వారా హియార్డిన్‌లు ఆల్ఫా-2 మరియు ఆల్ఫా-7.3 వివోలో IL-1β స్రావాన్ని ప్రేరేపిస్తుందో లేదో మేము పరిశోధించాము మరియు ఎలుకలలో G. డ్యూడెనాలిస్ యొక్క వ్యాధికారకతలో ఈ అణువుల పాత్రను నిర్ణయించాము.
ఆల్ఫా-2 మరియు ఆల్ఫా-7.3 గియార్డిన్‌లు ఎన్‌ఎల్‌ఆర్‌పి3 ఇన్‌ఫ్లమేసమ్ ఇన్ విట్రో యొక్క క్రియాశీలతను ప్రేరేపిస్తాయి.ఇది p20 కాస్పేస్-1 యొక్క క్రియాశీలతకు దారితీసింది, NLRP3, ప్రో-IL-1β మరియు ప్రో-కాస్పేస్-1 ప్రోటీన్ల యొక్క వ్యక్తీకరణ స్థాయిలలో పెరుగుదల, IL-1β స్రావంలో గణనీయమైన పెరుగుదల, ASA మచ్చలు ఏర్పడటానికి దారితీసింది. సైటోప్లాజం, మరియు ASA ఒలిగోమెరైజేషన్ యొక్క ఇండక్షన్.NLRP3 వాపు పురుషాంగ నష్టం ఎలుకలలో G. డ్యూడెనాలిస్ యొక్క వ్యాధికారకతను పెంచుతుంది.NLRP3-నిరోధిత ఎలుకల నుండి గావేజ్ ద్వారా తిత్తులతో చికిత్స చేయబడిన ఎలుకలు పెరిగిన సంఖ్యలో ట్రోఫోజోయిట్‌లను ప్రదర్శించాయి మరియు డ్యూడెనల్ విల్లీకి తీవ్రమైన నష్టాన్ని కలిగి ఉన్నాయి, ఇవి కుంచించుకుపోయిన మరియు కొమ్మలతో కూడిన నెక్రోటిక్ క్రిప్ట్‌ల ద్వారా వర్గీకరించబడతాయి.వివో ప్రయోగాలలో గియార్డిన్స్ ఆల్ఫా-2 మరియు ఆల్ఫా-7.3 NLRP3 ఇన్ఫ్లమేసమ్ ద్వారా IL-1β యొక్క స్రావాన్ని ప్రేరేపించగలవని మరియు గియార్డిన్స్ ఆల్ఫా-2 మరియు ఆల్ఫా-7.3తో రోగనిరోధకత ఎలుకలలో G. డ్యూడెనాలిస్ వ్యాధికారకతను తగ్గించిందని చూపించింది.
కలిసి తీసుకుంటే, ఈ అధ్యయనం యొక్క ఫలితాలు గియార్డియా ఆల్ఫా-2 మరియు ఆల్ఫా-7.3 హోస్ట్ NLRP3 ఇన్‌ఫ్లమేషన్‌ను నియంత్రించడానికి కారణమవుతాయని మరియు ఎలుకలలో G. డ్యూడెనాలిస్ యొక్క ఇన్ఫెక్టివిటీని తగ్గిస్తుందని సూచిస్తున్నాయి, ఇవి గియార్డియాసిస్‌ను నిరోధించే లక్ష్యాలుగా ఉన్నాయి.
గియార్డియా డ్యూడెనమ్ అనేది ఒక ఎక్స్‌ట్రాసెల్యులర్ ప్రోటోజోవాన్ పరాన్నజీవి, ఇది చిన్న ప్రేగులలో నివసిస్తుంది మరియు ఏటా 280 మిలియన్ల జియార్డియాసిస్ కేసులను అతిసారంతో కలిగిస్తుంది, ముఖ్యంగా అభివృద్ధి చెందుతున్న దేశాలలో చిన్న పిల్లలలో [1].M. డ్యూడెనమ్ తిత్తులతో కలుషితమైన నీరు లేదా ఆహారం ద్వారా ప్రజలు వ్యాధి బారిన పడతారు, అవి కడుపులోకి ప్రవేశించి గ్యాస్ట్రిక్ రసాలలో విసర్జించబడతాయి.గియార్డియా డ్యూడెనమ్ ట్రోఫోజోయిట్‌లు డ్యూడెనల్ ఎపిథీలియంకు చేరి, వికారం, వాంతులు, విరేచనాలు, కడుపు నొప్పి మరియు బరువు తగ్గడానికి కారణమవుతాయి.రోగనిరోధక శక్తి మరియు సిస్టిక్ ఫైబ్రోసిస్ ఉన్న వ్యక్తులు సంక్రమణకు గురవుతారు.నోటి మరియు అంగ సంపర్కం ద్వారా కూడా సంక్రమణ సంభవించవచ్చు [2].మెట్రోనిడాజోల్, టినిడాజోల్ మరియు నిటాజోక్సానైడ్ వంటి మందులు డ్యూడెనల్ ఇన్ఫెక్షన్‌లకు ప్రాధాన్య చికిత్స ఎంపికలు [3].అయినప్పటికీ, ఈ కీమోథెరపీ మందులు వికారం, కార్సినోజెనిసిస్ మరియు జెనోటాక్సిసిటీ [4] వంటి ప్రతికూల దుష్ప్రభావాలను కలిగిస్తాయి.అందువల్ల, G. డ్యూడెనాలిస్ ఇన్ఫెక్షన్‌ను నివారించడానికి మరింత ప్రభావవంతమైన వ్యూహాలను అభివృద్ధి చేయాలి.
ఇన్‌ఫ్లమేసమ్‌లు అనేది సైటోసోలిక్ ప్రోటీన్ కాంప్లెక్స్‌ల తరగతి, ఇవి సహజమైన రోగనిరోధక ప్రతిస్పందనలో భాగమై, వ్యాధికారక దాడికి వ్యతిరేకంగా రక్షించడానికి మరియు తాపజనక ప్రతిస్పందనలను మధ్యవర్తిత్వం చేయడంలో సహాయపడతాయి [5].ఈ ఇన్‌ఫ్లమేసమ్‌లలో, న్యూక్లియోటైడ్-బైండింగ్ ఒలిగోమెరైజేషన్ (NOD) రిసెప్టర్ 3 (NLRP3) న్యూక్లియోటైడ్-బైండింగ్ ఒలిగోమెరైజేషన్ (NLRP3) న్యూక్లియోటైడ్-బైండింగ్-లాంటి ఇన్‌ఫ్లమేసమ్ విస్తృతంగా అధ్యయనం చేయబడింది ఎందుకంటే ఇది వివిధ వ్యాధికారక/నష్టం/అనుబంధ నమూనాల ద్వారా గుర్తించబడుతుంది. DAMP), సహజమైన రోగనిరోధక వ్యవస్థను గుర్తించి, సక్రియం చేస్తుంది.మరియు అనేక శోథ వ్యాధులలో పేగు హోమియోస్టాసిస్‌ను నియంత్రిస్తుంది [6,7,8].ఇది ప్యాటర్న్ రికగ్నిషన్ రిసెప్టర్ (PRR) NLRP3, అడాప్టర్ అపోప్టోటిక్ స్పాటెడ్ ప్రొటీన్ (ASC) మరియు ఎఫెక్టార్ ప్రోకాస్‌పేస్-1 లేదా ప్రోకాస్‌పేస్-11ని కలిగి ఉంటుంది.NLRP3 ఇన్ఫ్లమేసమ్ వ్యాధికారక దాడికి వ్యతిరేకంగా హోస్ట్‌గా పనిచేస్తుంది, నియోస్పోరా కెనినమ్ [9], పారాకోక్సిడియోడ్స్ బ్రాసిలియెన్సిస్ [10] మరియు లీష్మానియా అధ్యయనాలలో గమనించబడింది.[11], అయితే NLRP3 ఇన్ఫ్లమేసమ్ యొక్క క్రియాశీలత రక్షిత రోగనిరోధక ప్రతిస్పందనలను పరిమితం చేస్తుంది మరియు వ్యాధి పురోగతిని తీవ్రతరం చేస్తుంది, ఉదాహరణకు, పురుగులలో [12].మా మునుపటి అన్వేషణల ఆధారంగా, ఎక్స్‌ట్రాసెల్యులర్ జి. డ్యూడెనాలిస్ ఎన్‌ఎల్‌ఆర్‌పి3 ఇన్‌ఫ్లమేషన్ యొక్క కణాంతర క్రియాశీలతను ప్రేరేపిస్తుందని మరియు ఎక్స్‌ట్రాసెల్యులర్ వెసికిల్స్ (ఇవిలు) స్రవించడం ద్వారా హోస్ట్ ఇన్‌ఫ్లమేటరీ ప్రతిస్పందనలను మాడ్యులేట్ చేస్తుందని మేము నివేదించాము [13].అయినప్పటికీ, వివోలో జి. డ్యూడెనాలిస్ ఇన్ఫెక్షన్‌లో ఎన్‌ఎల్‌ఆర్‌పి3 ఇన్‌ఫ్లమేసమ్ పాత్ర ఇంకా నిర్ణయించాల్సి ఉంది.
గియార్డిన్‌లు మొదట G. డ్యూడెనాలిస్ సైటోస్కెలిటన్ యొక్క నిర్మాణ భాగాలుగా వర్ణించబడ్డాయి మరియు చిన్న ప్రేగులలో ట్రోఫోజోయిట్ చలనశీలత మరియు ఎపిథీలియల్ సెల్ అటాచ్‌మెంట్‌లో ముఖ్యమైన పాత్ర పోషిస్తాయి.పర్యావరణానికి బాగా అనుగుణంగా మరియు వాటి వ్యాధికారకతను పెంచడానికి, G. డ్యూడెనాలిస్ ట్రోఫోజోయిట్‌లు 8 ఫ్లాగెల్లా, 1 మిడిల్ బాడీ మరియు 1 వెంట్రల్ డిస్క్ [14]తో కూడిన ప్రత్యేకమైన సైటోస్కెలెటల్ నిర్మాణాన్ని అభివృద్ధి చేశాయి.గియార్డియా ఆంత్రమూలం యొక్క ట్రోఫోజోయిట్‌లు వాటి సైటోస్కెలిటన్‌ను ఎగువ చిన్న ప్రేగులలోకి, ప్రత్యేకించి ఆంత్రమూలంలోకి చొచ్చుకుపోయి, ఎంట్రోసైట్‌లకు జోడించబడతాయి.అవి నిరంతరం వలసపోతాయి మరియు కణ జీవక్రియను ఉపయోగించి ఎపిథీలియల్ కణాలకు జోడించబడతాయి.అందువల్ల, వారి సైటోస్కెలిటన్ మరియు వైరలెన్స్ మధ్య సన్నిహిత సంబంధం ఉంది.గియార్డియా డ్యూడెనమ్‌కు ప్రత్యేకమైన గియార్డిన్‌లు సైటోస్కెలిటన్ నిర్మాణం యొక్క భాగాలు [15] మరియు వీటిని నాలుగు తరగతులుగా విభజించారు: α-, β-, γ- మరియు δ-గియార్డిన్‌లు.α- గియార్డిన్ కుటుంబంలో 21 మంది సభ్యులు ఉన్నారు, వీరంతా ఫాస్ఫోలిపిడ్‌లను బంధించే కాల్షియం-ఆధారిత సామర్థ్యాన్ని కలిగి ఉంటారు [16].అవి సైటోస్కెలిటన్‌ను కణ త్వచానికి కూడా కలుపుతాయి.G. డ్యూడెనాలిస్ వల్ల అతిసారం ఉన్న వ్యక్తులలో, α-గియార్డిన్‌లు ఇన్ఫెక్షన్ సమయంలో ఎక్కువగా వ్యక్తీకరించబడతాయి మరియు రోగనిరోధక శక్తిని కలిగి ఉంటాయి [17].గియార్డియా ఆల్ఫా-1 ఆధారంగా హెటెరోలాగస్ వ్యాక్సిన్‌లు ఎలుకలలో గియార్డియాసిస్ నుండి రక్షించబడతాయి మరియు టీకా అభివృద్ధికి సంభావ్య అభ్యర్థి యాంటిజెన్‌లు [18].ఆల్ఫా-8 గియార్డిన్, ప్లాస్మా పొర మరియు ఫ్లాగెల్లాలో స్థానీకరించబడింది, కానీ వెంట్రల్ డిస్క్‌లో కాదు, G. డ్యూడెనాలిస్ [19]లో ట్రోఫోజోయిట్‌ల చలనశీలత మరియు పెరుగుదల రేటును పెంచుతుంది.ఆల్ఫా-14 గియార్డిన్ ఫ్లాగెల్లాపై మైక్రోటూబ్యూల్ నిర్మాణాలకు జోడించబడుతుంది మరియు G. డ్యూడెనాలిస్ [20] యొక్క సాధ్యతను ప్రభావితం చేస్తుంది.ఆల్ఫా-11 గియార్డిన్ జీవిత చక్రం అంతటా సమృద్ధిగా ఉంటుంది మరియు ఆల్ఫా-11 గియార్డిన్ యొక్క అతిగా ఎక్స్‌ప్రెషన్ G. డ్యూడెనాలిస్‌నే దెబ్బతీస్తుంది [21].అయినప్పటికీ, ఆల్ఫా-2 గియార్డిన్ మరియు ఆల్ఫా-7.3 గియార్డిన్ G. డ్యూడెనాలిస్ ఇన్ఫెక్షన్ మరియు వాటి అంతర్లీన విధానాల నుండి రక్షణగా ఉన్నాయా అనేది అస్పష్టంగా ఉంది.
ఈ అధ్యయనంలో, రీకాంబినెంట్ యూకారియోటిక్ ఎక్స్‌ప్రెషన్ ప్లాస్మిడ్‌లు pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine మరియు pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 గియార్డిన్‌లు హోస్ట్ NLRP3ని సక్రియం చేయడానికి మౌస్ ప్రైమరీ పెరిటోనియల్ మాక్రోఫేజ్‌లలోకి బదిలీ చేయబడ్డాయి.ఇన్ఫ్లమేసమ్ టార్గెట్‌లు అప్పుడు పరీక్షించబడ్డాయి.మేము G. డ్యూడెనాలిస్ యొక్క వ్యాధికారకతలో NLRP3 ఇన్‌ఫ్లమేసమ్ పాత్రను కూడా అంచనా వేసాము, ఆల్ఫా-2 మరియు ఆల్ఫా-7,3 గియార్డిన్‌లు వివోలో NLRP3 ఇన్‌ఫ్లమేసమ్ యొక్క క్రియాశీలతను ప్రేరేపిస్తాయో లేదో పరిశోధించాము మరియు వ్యాధికారకతలో ఈ రెండు గియార్డిన్‌ల పాత్రలు ఉన్నాయని నిర్ధారించాము. జి. డ్యూడెనాలిస్.G. డ్యూడెనాలిస్ ఇన్ఫెక్షన్ నివారణకు మంచి లక్ష్యాలను అభివృద్ధి చేయడం మా ఉమ్మడి లక్ష్యం.
వైల్డ్ టైప్ (WT) C57BL/6 ఆడ ఎలుకలను 5-8 వారాల వయస్సు గల లియోనింగ్ చాంగ్‌షెంగ్ ప్రయోగాత్మక జంతు కేంద్రం (లియానింగ్, చైనా) నుండి కొనుగోలు చేశారు.ఎలుకలకు నీటికి ఉచిత ప్రవేశం ఉంది, క్రిమిరహితం చేయబడిన ఆహారాన్ని పొందింది మరియు 12/12 గంటల కాంతి/చీకటి చక్రంలో ఉంచబడ్డాయి.సంక్రమణకు ముందు, ఎలుకలు యాంపిసిలిన్ (1 mg/mL), వాంకోమైసిన్ (1 mg/mL), మరియు నియోమైసిన్ (1.4 mg/mL) (అన్నీ షాంఘై, చైనా, కృత్రిమ జీవుల నుండి కొనుగోలు చేయబడినవి) [22] లతో కలిపి త్రాగే నీటిలో యాంటిబయోటిక్‌లను యాడ్ లిబిటమ్ స్వీకరించాయి. ].].> 24 గంటలు తినే మరియు త్రాగే సామర్థ్యాన్ని కోల్పోయిన మరియు ≥ 20% శరీర బరువు కోల్పోయిన ఎలుకలు గర్భాశయ స్థానభ్రంశం ద్వారా మానవీయంగా అనాయాసంగా మార్చబడ్డాయి.
WB G. డ్యూడెనాలిస్ ట్రోఫోజోయిట్స్ (అమెరికన్ టైప్ కల్చర్ కలెక్షన్, మనస్సాస్, USA) 12.5% ​​పిండం బోవిన్ సీరం (FBS; ఎవ్రీ గ్రీన్, జెజియాంగ్, చైనా) మరియు 0.1% బోవిన్ బైల్ (సిగ్మా-మిస్‌అర్డ్రిచ్, USA, సెయింట్. )USA) మైక్రోఏరోబిక్ పరిస్థితుల్లో.సంగమ ట్రోఫోజోయిట్‌లను మంచు మీద సేకరించి తదుపరి పునరుత్పత్తి కోసం 1:4 నిష్పత్తిలో పంపారు.
గియార్డియా డ్యూడెనమ్ సిస్ట్‌లు గతంలో వివరించిన విధంగా ప్రేరేపించబడ్డాయి [23], ట్రోఫోజోయిట్‌లు లాగరిథమిక్ దశలో పండించబడ్డాయి మరియు తరువాత 1 × 106 ట్రోఫోజోయిట్స్/మిలీ తుది గాఢతకు pH 7.1 (సవరించిన TYI-S-33)తో కరిగించబడతాయి.పిత్త సాంద్రత 0.05% మధ్యస్థం).లాగరిథమిక్ వృద్ధి దశ వరకు 37 ° C వద్ద వాయురహిత పరిస్థితులలో ట్రోఫోజోయిట్‌లు కల్చర్ చేయబడ్డాయి.మీడియంను తిత్తిని ప్రేరేపించే మాధ్యమంగా మార్చండి (pH 7.8; సవరించిన TYI-S-33 మీడియం 1% పైత్య సాంద్రతతో) మరియు కల్చర్ G. డ్యూడెనాలిస్ 37 ° C వద్ద 48-96 గంటలు, ఈ సమయంలో ఏర్పడే తిత్తులు సూక్ష్మదర్శిని క్రింద గమనించబడ్డాయి.చాలా ట్రోఫోజోయిట్‌లు తిత్తులను ఏర్పరచడానికి ప్రేరేపించబడిన తర్వాత, మిగిలిన ట్రోఫోజోయిట్‌లను లైస్ చేయడానికి కల్చర్ మిశ్రమాన్ని సేకరించి, శుభ్రమైన డీయోనైజ్డ్ నీటిలో తిరిగి అమర్చారు.ఎలుకలలో గ్యాస్ట్రిక్ ట్యూబ్ ద్వారా తదుపరి విశ్లేషణల కోసం తిత్తులు లెక్కించబడ్డాయి మరియు 4 ° C వద్ద నిల్వ చేయబడ్డాయి.
గతంలో వివరించిన విధంగా గియార్డియా ఎక్స్‌ట్రాసెల్యులర్ వెసికిల్స్ (GEVలు) సుసంపన్నం చేయబడ్డాయి [13].లాగరిథమిక్ గ్రోత్ ఫేజ్‌లోని ట్రోఫోజోయిట్‌లు ఎక్సోసోమ్-డిప్లీటెడ్ FBS (బయోలాజికల్ ఇండస్ట్రీస్, బీట్-హేమెక్, ఇజ్రాయెల్)తో చివరిగా 1 × 106 పరాన్నజీవులు/mLతో తయారు చేయబడిన సవరించబడిన TYI-S-33 మాధ్యమంలో తిరిగి ఇవ్వబడ్డాయి మరియు 12 గంటల పాటు పొదిగేవి.10 నిమిషాలకు 2000 గ్రా, 45 నిమిషాలకు 10,000 గ్రా మరియు 60 నిమిషాలకు 100,000 గ్రా వద్ద సెంట్రిఫ్యూగేషన్ ద్వారా కల్చర్ సూపర్‌నాటెంట్ నుండి వేరుచేయబడింది.అవక్షేపాలను ఫాస్ఫేట్ బఫర్డ్ సెలైన్ (PBS)లో కరిగించారు, BCA ప్రోటీన్ అస్సే కిట్ (థర్మో ఫిషర్ సైంటిఫిక్, వాల్తామ్, MA, USA) ఉపయోగించి లెక్కించబడుతుంది మరియు -80 ° C. వద్ద నిల్వ చేయబడుతుంది లేదా తదుపరి విశ్లేషణల కోసం నేరుగా ఉపయోగించబడింది.
ప్రాథమిక మౌస్ పెరిటోనియల్ మాక్రోఫేజ్‌లు గతంలో వివరించిన విధంగా తయారు చేయబడ్డాయి [24].క్లుప్తంగా, ఎలుకలకు (6-8 వారాల వయస్సు) (ఇంట్రాపెరిటోనియల్‌గా [ip]) 2.5 ml 2.98% డిఫ్కో లిక్విడ్ థియోగ్లైకాల్ మీడియం (BD, ఫ్రాంక్లిన్ లేక్స్, NJ, USA)తో ఇంజెక్ట్ చేయబడింది మరియు 3-4 అంగిలిని తినిపించింది.అనాయాస తర్వాత ఎలుకల ఉదర కుహరం నుండి మాక్రోఫేజ్‌ల సస్పెన్షన్ సేకరించబడింది మరియు 10 నిమిషాలకు 1000 గ్రా వద్ద 3 సార్లు సెంట్రిఫ్యూజ్ చేయబడింది.సెల్ స్వచ్ఛత> 98% వరకు CD11b మార్కర్‌ని ఉపయోగించి ఫ్లో సైటోమెట్రీ ద్వారా సేకరించిన కణాలు కనుగొనబడ్డాయి, తర్వాత 6-వెల్ సెల్ కల్చర్ ప్లేట్‌లకు (4.5 x 106 కణాలు/బావి) జోడించబడ్డాయి మరియు 37 ° C వద్ద 10% FBS (బయోఇండస్ట్రీ)తో పొదిగేవి.మరియు 5% CO2.
1 ml TRIzol రియాజెంట్‌లో (Vazyme, Nanjing, China) 1 × 107 ట్రోఫోజోయిట్‌ల నుండి RNA సంగ్రహించబడింది, MonScript dsDNase (Monad, Wuhan, China)ని ఉపయోగించి మొత్తం G. duodenalis RNA నుండి జన్యుసంబంధమైన DNA సంగ్రహించబడింది మరియు కాంప్లిమెంటరీ DNA (cDNA) సమకాలీకరించబడింది. తయారీదారు సూచనల ప్రకారం MonScript RTIIII సూపర్ మిక్స్ (మొనాడ్)ని ఉపయోగించడం.
లక్ష్యం G. డ్యూడెనాలిస్ జన్యువు కోసం CDS సీక్వెన్స్ సమాచారం NCBI GenBank నుండి పొందబడింది.ప్రతి లక్ష్య జన్యువు కోసం నిర్దిష్ట అతుకులు లేని క్లోనింగ్ ప్రైమర్‌లను రూపొందించడానికి ప్రైమర్ 5.0ని ఉపయోగించండి.ఫార్వర్డ్ ప్రైమర్ (5′-3′) మూడు భాగాలను కలిగి ఉంటుంది: లీనియరైజ్డ్ వెక్టర్ pcDNA3.1(+) EcoRV (TGGTGGAATTCTGCAGAT)తో అతివ్యాప్తి చెందే క్రమం మరియు ATG మరియు GNN కోడన్‌లను ప్రారంభించండి (మొదటి బేస్ G కాకపోతే).వ్యక్తీకరణ యొక్క సామర్థ్యాన్ని మెరుగుపరచడానికి ఇది జరుగుతుంది.అదనంగా, కనీసం 16 bp కంబైన్డ్ బేస్‌లు (GC కంటెంట్ 40–60%/Tm సుమారు. 55 °C).రివర్స్ ప్రైమర్ (5′-3′) రెండు భాగాలను కలిగి ఉంటుంది, ఇది EcoRV-లీనియరైజ్డ్ వెక్టర్ pcDNA3.1(+) (GCCGCCACTGTGCTGGAT)తో అతివ్యాప్తి చెందే క్రమం మరియు కనీసం 16 bp కలిపి ఉంటుంది.(చివరి రెండు స్టాప్‌లు మినహా).స్థావరాలు) రీకాంబినెంట్ ప్లాస్మిడ్‌లు వాటి లేబుల్ చేయబడిన ప్రోటీన్‌లను వ్యక్తీకరించడానికి AA లేదా GA వంటి కోడాన్).ప్రైమర్ సీక్వెన్సులు టేబుల్ 1లో ఇవ్వబడ్డాయి మరియు వాటిని కాంగ్‌మెట్ బయోటెక్నాలజీ కో., లిమిటెడ్ (చాంగ్‌చున్, చైనా) సంశ్లేషణ చేసింది.
Pfu DNA పాలీమరేస్ (టియాంజెన్, బీజింగ్, చైనా) లేదా Ex-taq (తకారా బయోమెడికల్ టెక్నాలజీ [బీజింగ్] కో., లిమిటెడ్., బీజింగ్, చైనా) ఉపయోగించి తయారు చేయబడిన G. duodenalis cDNAని టెంప్లేట్‌గా ఉపయోగించి లక్ష్యాలు విస్తరించబడ్డాయి.యూకారియోటిక్ ఎక్స్‌ప్రెషన్ వెక్టర్ ప్లాస్మిడ్ pcDNA3.1(+) పరిమితి ఎంజైమ్ EcoRVతో సరళీకరించబడింది మరియు ఫాస్ట్ AP (థర్మో ఫిషర్ సైంటిఫిక్) ఉపయోగించి డీఫోస్ఫోరైలేట్ చేయబడింది.లీనియరైజ్డ్ pcDNA3.1(+) శకలాలు మరియు విస్తరించిన లక్ష్య జన్యు శకలాలు DNA జెల్ ప్యూరిఫికేషన్ కిట్ (టియాంజెన్) ఉపయోగించి శుద్ధి చేయబడ్డాయి మరియు నానోడ్రాప్ ND-2000 (థర్మో ఫిషర్ సైంటిఫిక్) ఉపయోగించి లెక్కించబడ్డాయి.pcDNA3.1(+) భాగం మరియు ప్రతి లక్ష్య జన్యు శకలం మోన్‌క్లోన్ సింగిల్ అసెంబ్లీ క్లోనింగ్ మిక్స్ (మొనాడ్ బయోటెక్ కో., లిమిటెడ్, సుజౌ, చైనా) ఉపయోగించి తిరిగి కలపబడ్డాయి మరియు కోమేట్ బయోసైన్స్ కంపెనీ లిమిటెడ్ (చాంగ్‌చున్, చైనా) ఉపయోగించి DNA సీక్వెన్సింగ్ ద్వారా నిర్ధారించబడ్డాయి..
శాన్‌ప్రెప్ ఎండోటాక్సిన్ లేని ప్లాస్మిడ్ మినీ కిట్ (సాంగోన్ బయోటెక్) ఉపయోగించి ఎండోటాక్సిన్ లేని ప్లాస్మిడ్‌లు pcDNA3.1(+)-alpha-2 మరియు pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 ఉత్పత్తి చేయబడ్డాయి.ఎల్యూషన్ బఫర్‌లోని EDTA బదిలీ పరీక్షకు అంతరాయం కలిగించదని నిర్ధారించడానికి గాఢత 500 ng/µl కంటే ఎక్కువగా నిర్వహించబడుతుంది.ప్రాథమిక మౌస్ పెరిటోనియల్ మాక్రోఫేజ్‌లు 12 గంటల పాటు పూర్తి RPMI 1640 మీడియం (బయోలాజికల్ ఇండస్ట్రీస్)తో 6-బావి ప్లేట్లలో కల్చర్ చేయబడ్డాయి, ఆపై కణాలు పెన్సిలిన్ మరియు స్ట్రెప్టోమైసిన్‌లను తొలగించడానికి వెచ్చని PBSలో 3 సార్లు కడిగి, ఆపై మీడియంలో పూర్తి మాధ్యమంతో భర్తీ చేయబడ్డాయి.ఎండోటాక్సిన్-రహిత ప్లాస్మిడ్‌లు pcDNA3.1(+)-alpha-2 మరియు pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 (2.5 μg) 125 μl Opti-MEM తగ్గిన సీరం మాధ్యమంలో (గిబ్కో, థర్మో ఫిషర్ సైంటిఫిక్) కరిగించబడ్డాయి..అప్పుడు 5 µl లిపోఫెక్టమైన్ 2000 ట్రాన్స్‌ఫెక్షన్ రియాజెంట్ (ఇన్విట్రోజెన్, థర్మో ఫిషర్ సైంటిఫిక్) 125 µl తక్కువ సీరం Opti-MEM మాధ్యమంలో కరిగించబడింది.లిపోఫెక్టమైన్ 2000తో పలుచన చేసిన ఎండోటాక్సిన్ లేని ప్లాస్మిడ్‌ను కలపడం ద్వారా లిపోజోమ్-DNA కాంప్లెక్స్‌లను సిద్ధం చేయండి మరియు మిశ్రమాన్ని గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద 5 నిమిషాలు నిలబడేలా చేయండి.ప్రతి బావిలోని కణాలకు విడిగా కాంప్లెక్స్‌లను బదిలీ చేయండి మరియు నెమ్మదిగా కలపండి.4 గంటల తర్వాత, సెల్ కల్చర్ మాధ్యమం 2 ml పూర్తి RPMI 1640 మాధ్యమంతో భర్తీ చేయబడింది మరియు కల్చర్ 24 గంటల పాటు కొనసాగించబడింది.తాజా సెల్ కల్చర్ మాధ్యమం కణాలకు జోడించబడింది మరియు పరీక్ష రూపకల్పనపై ఆధారపడి వివిధ సమయ బిందువుల కోసం పొదిగేది.
గతంలో వివరించిన విధంగా సూపర్‌నాటెంట్లు మరియు సెల్ లైసేట్ల నుండి ప్రోటీన్ నమూనాలు తయారు చేయబడ్డాయి [25].ప్రో-IL-1β, ప్రో-కాస్పేస్-1, కాస్పేస్-1 p20, NLRP3, β-ఆక్టిన్ మరియు హిస్-ట్యాగ్ కోసం మెంబ్రేన్ బదిలీ పారామితులు 200 mA/90 నిమిషాలు.ఇంటర్‌లుకిన్ 1β (IL-1β; R&D సిస్టమ్స్, మిన్నియాపాలిస్, మిన్నెసోటా, USA), కాస్‌పేస్-1 (p20) (అడిపోజెన్, స్విట్జర్లాండ్) మరియు NLRP3 (అడిపోజెన్ SA, ఎపలింగేస్, స్విట్జర్లాండ్) మరియు 1:5000 (Amy scient, లక్ష్యం అతని Scient) వుహాన్, చైనా) మరియు β-ఆక్టిన్ (ప్రోటీన్‌టెక్, వుహాన్, చైనా).
గతంలో వివరించిన విధంగా డిస్సిసినిమైడ్ సబ్‌రేట్ (DSS)తో క్రాస్-లింకింగ్ జరిగింది [26].25 mM Na2PO4, 187.5 mM NaCl, 25 mM HEPES మరియు 125 mM NaHCO3 కలిగిన 50 µl ASC రియాక్షన్ బఫర్ (pH 8.0)లో కణాలు 3 సార్లు చల్లని PBSతో కడిగి 27 గేజ్ సూదితో పూర్తిగా లైస్ చేయబడ్డాయి.మిశ్రమం 3 నిమిషాలకు 5000 గ్రా వద్ద సెంట్రిఫ్యూజ్ చేయబడింది మరియు గుళికను 10 µl DSS (DMSOలో 25 mM) మరియు 37 ° C వద్ద 30 నిమిషాల పాటు 40 µl ASC రియాక్షన్ బఫర్‌తో కుట్టారు.10 నిమిషాలకు 5000 గ్రా వద్ద సెంట్రిఫ్యూగేషన్ తర్వాత, గుళికను 40 µl ASC రియాక్షన్ బఫర్ మరియు 10 µl 6x ప్రోటీన్ లోడింగ్ బఫర్ (ట్రాన్స్‌జెన్, బీజింగ్, చైనా) ద్రావణంలో కరిగించి, ఆపై ద్రావణాన్ని గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద 15 వరకు చల్లారు. నిమి., అప్పుడు 10 నిమిషాలు ఉడకబెట్టండి.ప్రోటీన్ నమూనాలను 1:500 పలుచన నిష్పత్తిలో ప్రాథమిక ASC వ్యతిరేక ప్రతిరోధకాలను (వాన్‌లీబియో, షెన్యాంగ్, చైనా) ఉపయోగించి వెస్ట్రన్ బ్లాటింగ్‌కు గురి చేశారు.
గతంలో వివరించిన విధానాన్ని అనుసరించి [13], సెల్ కల్చర్ సూపర్‌నాటెంట్లు సేకరించబడ్డాయి మరియు మౌస్ IL-1 బీటా ELISA కిట్ (ఇన్విట్రోజెన్, థర్మో ఫిషర్ సైంటిఫిక్) ఉపయోగించి ప్రో-ఇన్‌ఫ్లమేటరీ సైటోకిన్ IL-1β స్రావం నిర్ణయించబడుతుంది.IL-1β ప్రామాణిక వక్రరేఖను ఉపయోగించి OD450nm విలువలను ప్రోటీన్ సాంద్రతలకు మార్చండి.
కవర్‌లిప్‌లపై పూసిన కణాలు వెచ్చని PBSలో 3 సార్లు సున్నితంగా కడుగుతారు, టిష్యూ సెల్ ఫిక్సేటివ్‌లో (బయోషార్ప్, బీజింగ్, చైనా) 10 నిమిషాలు గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద (RT), 0.1% ట్రిటాన్ X-పెర్మీబిలైజ్‌లో 100 (PBSలో కరిగించబడుతుంది; బయోషార్ప్) ) గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద 20 నిమిషాలు మరియు గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద 2 గంటల పాటు 5% బోవిన్ సీరం అల్బుమిన్ (PBSలో)లో నిరోధించండి.కణాలు వరుసగా ASC (1:100 పలుచన) లేదా NLRP3 (1:100 పలుచన)కు వ్యతిరేకంగా ప్రాథమిక ప్రతిరోధకాలతో 4 ° C వద్ద రాత్రిపూట పొదిగేవి మరియు Cy3 మేక యాంటీ రాబిట్ IgG(H+L) (1:400; EarthOx) , శాన్ ఫ్రాన్సిస్కో, CA, USA) లేదా FITC-కంజుగేటెడ్ మేక యాంటీ-మౌస్ IgG (1:400; Earthox) రాత్రిపూట 37°C వద్ద చీకటిలో 1 గంట.న్యూక్లియైలు హోచ్స్ట్ 33258 (10 μg/ml; UE, సుజౌ, చైనా)తో 5 నిమిషాల పాటు తడిసినవి మరియు ఫ్లోరోసెన్స్ మైక్రోస్కోప్ (ఒలింపస్ కార్పొరేషన్, టోక్యో, జపాన్) క్రింద పరిశీలించబడ్డాయి.
ఎలుకలు నాలుగు సమూహాలుగా విభజించబడ్డాయి (ప్రతి సమూహంలో n = 7): (i) PBS-చికిత్స చేయబడిన ప్రతికూల నియంత్రణ సమూహం (PBS మాత్రమే; గావేజ్ 100 µl/మౌస్ PBS తర్వాత రోజువారీ ఇంట్రాపెరిటోనియల్ ఇంజెక్షన్ 100 µl/మౌస్ PBS 3 గంటల తర్వాత) ., నిరంతరం 7 రోజులు);(ii) MCC950 ఇన్హిబిటర్‌తో చికిత్స చేయబడిన ప్రతికూల నియంత్రణ సమూహం [27] (PBS గావేజ్ ద్వారా 100 µl/మౌస్, 3 గంటల తర్వాత, 10 mg/kg శరీర బరువు [BW] MCC950 [PBSలో] ప్రతిరోజూ ఇంట్రాపెరిటోనియల్‌గా నిర్వహించబడుతుంది, వ్యవధి 7 రోజులు);(iii) G. డ్యూడెనాలిస్ సిస్ట్ ఇన్‌ఫెక్షన్ గ్రూప్ (1.5 x 106 సిస్ట్‌లు/మౌస్ బై గావేజ్, 3 గంటల తర్వాత, 100 μl/మౌస్ PBS ఇంట్రాపెరిటోనియల్‌గా 7 రోజులు రోజువారీగా నిర్వహించబడుతుంది);(iv) G. డ్యూడెనాలిస్ సిస్ట్ కంబైన్డ్ ఇన్ఫెక్షన్ గ్రూప్ MCC950 ఇన్‌హిబిటర్ ట్రీట్‌మెంట్ గ్రూప్ (1.5×106 సిస్ట్‌లు/మౌస్ ద్వారా గావేజ్, 10mg/kg శరీర బరువు MCC950 ఇంట్రాపెరిటోనియల్‌గా ప్రతిరోజూ 3h వద్ద).ప్రతి ఎలుక యొక్క శరీర బరువు ప్రతిరోజూ పర్యవేక్షించబడుతుంది మరియు 7వ రోజున అన్ని ఎలుకలను అనాయాసంగా మార్చారు.హార్వెస్టెడ్ డ్యూడెనమ్ (3 సెం.మీ పొడవు) 1 ml PBSలో చిన్న ముక్కలుగా కట్ చేయబడింది, PBSలో 4 ° C వద్ద రాత్రిపూట తిత్తులు నాశనం చేయబడ్డాయి మరియు G. డ్యూడెనాలిస్ ట్రోఫోజోయిట్స్.హెమటాక్సిలిన్ మరియు ఇయోసిన్ (H&E) మరక కోసం తాజా డ్యూడెనమ్ (1 సెం.మీ పొడవు) వేరుచేయబడింది.
ఎలుకలను రెండు గ్రూపులుగా విభజించారు: (i) MOCK కంట్రోల్ గ్రూప్ మరియు (ii) MCC950 ఇన్హిబిటర్ గ్రూప్.ప్రతి సమూహంలో ఐదు చికిత్సలు ఉన్నాయి (n = 7/చికిత్స సమూహం): (i) PBS చికిత్స ప్రతికూల నియంత్రణ సమూహం (PBS మాత్రమే; 100 µl/మౌస్ PBS, ఇంట్రామస్కులర్ (IM) ఇంజెక్షన్ (టిబియాలిస్ పూర్వం) [28, 29] ;( ii) pcDNA3.1(+) ప్లాస్మిడ్ నెగటివ్ కంట్రోల్ గ్రూప్ (100 µg/మౌస్ DNA, ఇంట్రామస్కులర్ ఇంజెక్షన్ ద్వారా) G. డ్యూడెనాలిస్ సిస్ట్ ఇన్ఫెక్షన్ పాజిటివ్ కంట్రోల్ గ్రూప్ (1.5 x 106 cysts/mouse, gavage ద్వారా) (iv) a ప్లాస్మిడ్ pcDNA3.1(+)-alpha-2 (100 μg/మౌస్ DNA, ఇంట్రామస్కులర్ ఇంజెక్షన్ ద్వారా)తో చికిత్స చేయబడిన సమూహం మరియు (v) ప్లాస్మిడ్ pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 (100 µg/మౌస్)తో చికిత్స చేయబడిన సమూహం DNA, 12 గంటల పాసేజ్ తర్వాత, MCC950 ఇన్హిబిటర్ గ్రూప్‌లోని ఎలుకలు 7 రోజుల పాటు MCC950 (10 mg/kg శరీర బరువు) యొక్క రోజువారీ ఇంట్రాపెరిటోనియల్ ఇంజెక్షన్‌ను పొందాయి, అయితే MOCK సమూహంలోని ఎలుకలు సమాన పరిమాణంలో PBS చికిత్సను పొందాయి. రక్త నమూనాలు IL-1β స్థాయిల కోసం ఎంజైమ్-లింక్డ్ ఇమ్యునోసోర్బెంట్ అస్సే (ELISA) ఉపయోగించి సీరం నమూనాలను ఐబాల్స్ ఎలుకల నుండి సేకరించి, 4 °C వద్ద రాత్రిపూట వదిలివేయబడింది.
ముప్పై-ఐదు ఎలుకలను ఐదు సమూహాలుగా విభజించారు (n = 7/సమూహం).గ్రూప్ 1 అనేది PBSతో చికిత్స చేయబడిన ప్రతికూల నియంత్రణ సమూహం: ఎలుకలు 100 μl PBS ను ఇంట్రామస్కులర్‌గా మరియు 3 రోజుల తర్వాత గావేజ్ ద్వారా పొందాయి.గ్రూప్ 2 అనేది G. డ్యూడెనాలిస్ సిస్ట్‌లతో సోకిన సానుకూల నియంత్రణ సమూహం: ఎలుకలు 100 μl PBSతో ఇంజెక్ట్ చేయబడ్డాయి మరియు 3 రోజుల తర్వాత 1.5 x 106 సిస్ట్‌లు/మౌస్ ఇంట్రాగాస్ట్రిక్‌గా ఇంజెక్ట్ చేయబడ్డాయి.మూడవ సమూహం - డ్యూడెనల్ సిస్ట్ ఇన్ఫెక్షన్ కోసం నియంత్రణ సమూహంతో కలిపి pcDNA3.1(+)తో ప్లాస్మిడ్ ఇమ్యునైజేషన్: ఎలుకలు 100 μg ప్లాస్మిడ్ DNA pcDNA3.1(+)(im) నోటి ద్వారా, 1.5×106 తిత్తులు/మౌస్ 3ని పొందాయి. రోజులు.4 మరియు 5 సమూహాలు G. డ్యూడెనాలిస్ సిస్ట్ ఇన్ఫెక్షన్‌తో కలిపి pcDNA3.1(+)-ఆల్ఫా-2 గియార్డిన్ ప్లాస్మిడ్ లేదా pcDNA3.1(+)-ఆల్ఫా-7.3 గియార్డిన్ ప్లాస్మిడ్.ప్రయోగాత్మక సమూహం: ఎలుకలు 100 μg pcDNA3ని అందుకున్నాయి.1(+)-గియార్డిన్ ప్లాస్మిడ్ DNA (im), తర్వాత 3 రోజుల తర్వాత, 1.5 × 106 సిస్ట్‌లు/మౌస్ గావేజ్ ద్వారా ఇంజెక్ట్ చేయబడింది.ట్యూబ్ ద్వారా G. డ్యూడెనాలిస్ తిత్తిని ప్రవేశపెట్టిన తర్వాత ప్రతి మౌస్ యొక్క శరీర బరువు పర్యవేక్షించబడుతుంది.పరాన్నజీవి లోడ్ కొలతలు మరియు HE స్టెయినింగ్ విశ్లేషణ కోసం తాజా డ్యూడెనమ్ సేకరించబడింది.
హిస్టోపాథలాజికల్ మార్పులు గతంలో ప్రచురించిన విధానం ప్రకారం విశ్లేషించబడ్డాయి [30].తాజా డ్యూడెనమ్ టిష్యూ సెల్ ఫిక్సేటివ్‌తో పరిష్కరించబడింది, పారాఫిన్‌లో పొందుపరచబడింది, 4 μm విభాగాలుగా కత్తిరించబడింది, H&E తో తడిసినది మరియు తేలికపాటి సూక్ష్మదర్శిని క్రింద విశ్లేషించబడింది.ఏడు స్వతంత్ర ఎలుకల నుండి ఏడు కణజాల విభాగాలలో ప్రాతినిధ్య రోగలక్షణ మార్పులు చికిత్స గురించి తెలియని పాథాలజిస్ట్ చేత మూల్యాంకనం చేయబడ్డాయి మరియు 200x మాగ్నిఫికేషన్ వద్ద సంగ్రహించబడ్డాయి.విల్లీ యొక్క పొడవు మరియు క్రిప్ట్‌ల లోతు గతంలో వివరించిన పద్ధతులకు అనుగుణంగా కొలుస్తారు.
విట్రో మరియు ఇన్ వివో ఫలితాలు మూడుసార్లు పొందబడ్డాయి.గ్రాప్‌ప్యాడ్ ప్రిజం 7.00 (గ్రాప్‌ప్యాడ్ సాఫ్ట్‌వేర్ ఇంక్., లా జోల్లా, CA, USA) ఉపయోగించి గ్రాఫ్‌లు రూపొందించబడ్డాయి.రెండు సమూహాల మధ్య తేడాలు t-test ద్వారా విశ్లేషించబడ్డాయి, అయితే ≥3 సమూహాల మధ్య తేడాలు SPSS సాఫ్ట్‌వేర్ (వెర్షన్ 22.0; SPSS IBM కార్ప్., ఆర్మోంక్, NY, USA) ఉపయోగించి వన్-వే విశ్లేషణ (ANOVA) ద్వారా విశ్లేషించబడ్డాయి.బోన్‌ఫెరోని యొక్క పోస్ట్ హాక్ టెస్ట్ (B) తర్వాత లెవెన్ పరీక్షను ఉపయోగించి వైవిధ్యం యొక్క సజాతీయత కోసం డేటా విశ్లేషించబడింది.ప్రాముఖ్యత P <0.05, P <0.01 మరియు P <0.001 (గణనీయమైనది కాదు [ns]) (P> 0.05)గా వ్యక్తీకరించబడింది.
క్యోటో ఎన్‌సైక్లోపీడియా ఆఫ్ జీన్స్ అండ్ జీనోమ్స్ (KEGG)లో GEV ప్రోటీమిక్స్ యొక్క మా మునుపటి విశ్లేషణ ఇన్‌ఫ్లమేటరీ సిగ్నలింగ్ పాత్‌వేస్ [13] యొక్క క్రియాశీలతలో అనేక లక్ష్యాలను కలిగి ఉండవచ్చని చూపించింది.మేము రెండు ఆశాజనక లక్ష్యాలను ఎంచుకున్నాము, ఆల్ఫా-2 మరియు ఆల్ఫా-7.3 గియార్డిన్‌లు, ఈ అణువులను విస్తరించి, వాటిని pcDNA3.1(+) యూకారియోటిక్ ఎక్స్‌ప్రెషన్ వెక్టర్‌ని నిర్మించడానికి ఉపయోగిస్తాము.సీక్వెన్సింగ్ తర్వాత, రీకాంబినెంట్ pcDNA3.1(+)-ఆల్ఫా-2 మరియు ఆల్ఫా-7.3 గియార్డిన్ ఎక్స్‌ప్రెషన్ ప్లాస్మిడ్‌లు ప్రైమరీ మౌస్ పెరిటోనియల్ మాక్రోఫేజ్‌లుగా బదిలీ చేయబడ్డాయి మరియు కాస్పేస్-1 p20 సిగ్నేచర్ ప్రొటీన్ ఆఫ్ ఇన్ఫ్లమేషన్ (యాక్టివేటెడ్ కాస్‌పేస్-1 యొక్క భాగం) గుర్తించబడింది. మంటను ప్రేరేపించగల కీలకమైన అణువులను విశదీకరించడం.ఆల్ఫా-2 మరియు ఆల్ఫా-7.3 గియార్డిన్‌లు GEV మాదిరిగానే p20 కాస్‌పేస్-1 వ్యక్తీకరణను ప్రేరేపించగలవని ఫలితాలు చూపించాయి.చికిత్స చేయని ప్రతికూల నియంత్రణ (PBS మాత్రమే) మరియు ప్లాస్మిడ్ నియంత్రణ pcDNA3.1(+) (మూర్తి 1)లో కాస్‌పేస్-1 క్రియాశీలతపై ఎటువంటి ప్రభావం కనుగొనబడలేదు.
pcDNA3.1(+)-alpha-2 మరియు alpha-7.3 giardins ద్వారా p20 కాస్పేస్-1 యాక్టివేషన్ యొక్క కొలత.రీకాంబినెంట్ యూకారియోటిక్ ఎక్స్‌ప్రెషన్ ప్లాస్మిడ్‌లు pcDNA3.1(+)-ఆల్ఫా-2 మరియు ఆల్ఫా-7.3 గియార్డిన్‌లు (ప్రతి లేన్ పైన) ప్రైమరీ మౌస్ పెరిటోనియల్ మాక్రోఫేజ్‌లలోకి బదిలీ చేయబడ్డాయి మరియు కల్చర్ సూపర్‌నాటెంట్‌లు 24 గంటల తర్వాత సేకరించబడ్డాయి.సిగ్నేచర్ కాస్పేస్-1 p20 ఇన్ఫ్లమేసమ్ ప్రోటీన్ యొక్క వ్యక్తీకరణ స్థాయిలను కొలవడానికి వెస్ట్రన్ బ్లాటింగ్ ఉపయోగించబడింది.PBS-మాత్రమే చికిత్స సమూహం (లేన్ C) మరియు pcDNA3.1(+) మోనోథెరపీ గ్రూప్ (pcDNA3.1 లేన్) ప్రతికూల నియంత్రణగా ఉపయోగించబడ్డాయి మరియు GEV చికిత్స సమూహం సానుకూల నియంత్రణగా ఉపయోగించబడింది.ప్రతి ప్రోటీన్‌లో హిస్టిడిన్ ట్యాగ్‌ని గుర్తించడం ద్వారా రీకాంబినెంట్ ప్రోటీన్ యొక్క వ్యక్తీకరణ నిర్ధారించబడింది మరియు ఆశించిన ప్రోటీన్ బ్యాండ్‌లు ఆల్ఫా-2 గియార్డిన్ (38.2 kDa) మరియు ఆల్ఫా-7.3 గియార్డిన్ (37.2 kDa).GEV, గియార్డియా డ్యూడెనమ్ ఎక్స్‌ట్రాసెల్యులర్ వెసికిల్స్, pcDNA3.1(+), EcoRV-లీనియరైజ్డ్ వెక్టర్, SUP, సూపర్‌నాటెంట్
ఆల్ఫా-2 గియార్డిన్ మరియు ఆల్ఫా-7.3 గియార్డిన్ p20 కాస్‌పేస్-1 వ్యక్తీకరణను ప్రేరేపిస్తుందో లేదో తెలుసుకోవడానికి మరియు హోస్ట్ NLRP3 ఇన్‌ఫ్లమేటరీ రెస్పాన్స్, pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine మరియు pcDNA3.1(+)-ఆల్ఫాను యాక్టివేట్ చేయడంలో పాత్ర పోషిస్తుంది. -7.3 గియార్డిన్ రీకాంబినెంట్ ప్లాస్మిడ్ DNAతో ప్రైమరీ మౌస్ పెరిటోనియల్ మాక్రోఫేజ్‌లలోకి బదిలీ చేయబడింది మరియు కీ ఇన్ఫ్లమేటరీ ప్రోటీన్‌ల NLRP3 యొక్క వ్యక్తీకరణ, స్థానికీకరణ మరియు ఒలిగోమెరైజేషన్ స్థాయిలు నిర్ణయించబడ్డాయి.ఈ ప్రయోగంలో, GEV సానుకూల నియంత్రణ సమూహంగా ఉపయోగించబడింది మరియు చికిత్స లేని సమూహం (PBS మాత్రమే) లేదా pcDNA3.1(+) బదిలీ చికిత్స సమూహం ప్రతికూల సమూహం.ఫలితాలు GEV సమూహంలో వలె, గియార్డిన్ pcDNA3.1(+)-alpha-2 మరియు గియార్డిన్ pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 యొక్క రీకాంబినెంట్ ప్లాస్మిడ్ DNA ఫలితంగా NLRP3, ప్రో-IL-1β మరియు ప్రోకాస్పేస్-1 మరియు కాస్పేస్-1 యాక్టివేషన్ (Fig. 2a).అదనంగా, రెండు గియార్డిన్‌లు ముఖ్యమైన IL-1β స్రావాన్ని ప్రేరేపించాయి (pcDNA3.1: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P = 0.1000; ఆల్ఫా-2 గియార్డిన్: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P = 0.00 );ఆల్ఫా-7.3 గియార్డిన్: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P<0.0001;GEV: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P = 0.0047) (Figure 2b).pcDNA3.1(+)-alpha-2 లేదా pcDNA3.1(+)-alpha-కి విరుద్ధంగా, చాలా ASC ప్రొటీన్‌లు నో-ట్రీట్‌మెంట్ గ్రూపులో లేదా pcDNA3.1(+) ప్లాస్మిడ్‌తో బదిలీ చేయబడిన చికిత్స సమూహంలో మోనోమెరిక్‌గా ఉన్నాయి. 7.3 గియార్డిన్.GEV పాజిటివ్ కంట్రోల్ గ్రూప్ లేదా గ్రూప్ యొక్క రీకాంబినెంట్ ప్లాస్మిడ్ DNAలో ASC ఒలిగోమెరైజేషన్ సంభవించింది, ఇది ఒలిగోమెరిక్ రూపాన్ని చూపుతుంది (మూర్తి 2c).ఆల్ఫా-2 గియార్డిన్ మరియు ఆల్ఫా-7,3 గియార్డిన్ NLRP3 ఇన్ఫ్లమేషన్ యాక్టివేషన్‌ను ప్రేరేపించగలవని ఈ ప్రాథమిక డేటా సూచిస్తుంది.ASC మరియు NLRP3 యొక్క స్థానికీకరణ యొక్క తదుపరి ఇమ్యునోఫ్లోరోసెంట్ అధ్యయనాలు ప్రతికూల నియంత్రణ సమూహంలో, ASC ప్రోటీన్ సైటోప్లాజం అంతటా చెల్లాచెదురుగా ఉందని మరియు గియార్డిన్ లేదా pcDNA3తో pcDNA3.1(+)-alpha-2ని ప్రేరేపించడంపై డాట్ సిగ్నల్‌గా కనిపించిందని తేలింది.1(+)-ఆల్ఫా-7,3 గియార్డిన్ గ్రూప్ లేదా GEV పాజిటివ్ కంట్రోల్ గ్రూప్ (Figure 2d).ప్రతికూల నియంత్రణ మరియు ప్లాస్మిడ్-చికిత్స చేయబడిన pcDNA 3.1 సమూహాలలో, NLRP3 ప్రోటీన్ సిగ్నల్ కనుగొనబడలేదు, అయితే pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine లేదా pcDNA3.1(+)-alpha-7.3కి ప్రతిస్పందనగా ఫ్లోరోసెంట్ సిగ్నల్ డాట్. గుర్తించబడింది..గియార్డిన్ సైటోప్లాజంలో లేదా HEV (Fig. 2e) ఉద్దీపనపై కనుగొనబడుతుంది.G. డ్యూడెనాలిస్ గియార్డిన్ ఆల్ఫా-2 మరియు గియార్డిన్ ఆల్ఫా-7.3 మౌస్ ప్రైమరీ పెరిటోనియల్ మాక్రోఫేజ్‌లలో ఎన్‌ఎల్‌ఆర్‌పి3 ఇన్‌ఫ్లమేసమ్‌ను యాక్టివేట్ చేస్తాయని ఈ డేటా మరింత నిరూపిస్తుంది.
pcDNA3.1(+)-alpha-2 గియార్డిన్ మరియు pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 గియార్డిన్ మౌస్ పెరిటోనియల్ మాక్రోఫేజ్‌లలో NLRP3 ఇన్ఫ్లమేసమ్‌ను సక్రియం చేస్తాయి.రీకాంబినెంట్ యూకారియోటిక్ ఎక్స్‌ప్రెషన్ ప్లాస్మిడ్‌లు pcDNA3.1(+)-alpha-2 గియార్డిన్ మరియు pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 గియార్డిన్‌లను ప్రైమరీ మురైన్ పెరిటోనియల్ మాక్రోఫేజ్‌లు మరియు కణాలలోకి బదిలీ చేయండి లేదా వ్యక్తీకరణ, ఒలిగోమెరైజేషన్ విశ్లేషణ కోసం 24 గంటలలోపు సూపర్‌నాటెంట్‌ను కోయండి. , స్రావం.మరియు కీ ఇన్ఫ్లమేటరీ ప్రోటీన్ల స్థానికీకరణ.PBS-మాత్రమే (C) సమూహం మరియు pcDNA3.1(+) ఒకే చికిత్స సమూహం ప్రతికూల నియంత్రణగా ఉపయోగించబడ్డాయి మరియు GEV చికిత్స సమూహం సానుకూల సమూహంగా ఉపయోగించబడింది.NLRP3, ప్రో-IL-1β, ప్రో-కాస్పేస్-1 మరియు p20 కాస్పేస్-1తో సహా కీలకమైన ఇన్ఫ్లమేటరీ ప్రోటీన్లు NLRP3 వెస్ట్రన్ బ్లాటింగ్ ద్వారా కనుగొనబడ్డాయి.b సూపర్‌నాటెంట్లలో IL-1β స్రావం స్థాయిలు ఎంజైమ్-లింక్డ్ ఇమ్యునోసోర్బెంట్ అస్సే (ELISA) ఉపయోగించి నిర్ణయించబడ్డాయి.నియంత్రణ మరియు ప్రయోగాత్మక సమూహాల మధ్య తేడాలు SPSS సాఫ్ట్‌వేర్ వెర్షన్ 22.0ని ఉపయోగించి వన్-వే అనాలిసిస్ ఆఫ్ వేరియెన్స్ (ANOVA) ద్వారా విశ్లేషించబడ్డాయి.**P <0.01 మరియు ***P <0.001 సమూహాల మధ్య ముఖ్యమైన తేడాలను ఆస్టరిస్క్‌లు సూచిస్తాయి.c గుళికలలో ASC ఒలిగోమెరైజేషన్ స్థాయిలు DSS క్రాస్-లింకింగ్ విశ్లేషణ ద్వారా నిర్ణయించబడతాయి, అయితే సెల్ లైసేట్లలోని ASC స్థాయిలు లోడింగ్ నియంత్రణగా ఉపయోగించబడ్డాయి.d ఇమ్యునోఫ్లోరోసెన్స్ ఉపయోగించి ISC స్థానికీకరణ యొక్క విజువలైజేషన్.e ఇమ్యునోఫ్లోరోసెన్స్ NLRP3 యొక్క స్థానికీకరణను దృశ్యమానం చేయడానికి ఉపయోగించబడింది.ASC, అపోప్టోటిక్ స్పెక్ లాంటి ప్రోటీన్;IL, ఇంటర్‌లుకిన్;NLRP3, న్యూక్లియోటైడ్-బైండింగ్ ఒలిగోమెరైజేషన్-లాంటి రిసెప్టర్ 3;ns, ముఖ్యమైనది కాదు (P > 0.05)
G. డ్యూడెనాలిస్ మరియు అది స్రవించే GEVలు రెండూ NLRP3 ఇన్‌ఫ్లమేసమ్‌ను సక్రియం చేస్తాయి మరియు విట్రోలో హోస్ట్ ఇన్‌ఫ్లమేటరీ ప్రతిస్పందనలను నియంత్రిస్తాయి.అందువల్ల, G. డ్యూడెనాలిస్ యొక్క వ్యాధికారకతలో NLRP3 ఇన్ఫ్లమేసమ్ పాత్ర అస్పష్టంగానే ఉంది.ఈ సమస్యను పరిశోధించడానికి, మేము G. డ్యూడెనాలిస్ తిత్తి సోకిన ఎలుకలు మరియు G. duodenalis cyst + MCC950 ఇన్హిబిటర్ చికిత్సతో సోకిన ఎలుకల మధ్య ఒక ప్రయోగాన్ని రూపొందించాము మరియు G. డ్యూడెనాలిస్ తిత్తి సోకినప్పుడు NLRP3 ఇన్‌ఫ్లమేసమ్ ఎక్స్‌ప్రెషన్‌ను పోల్చాము.ప్రయోగం యొక్క వివరణాత్మక పథకం అంజీర్ 3aలో చూపబడింది.వివిధ చికిత్స సమూహాలలో ఎలుకల శరీర బరువులో మార్పులు తిత్తులతో సంక్రమణ తర్వాత 7 రోజులు పర్యవేక్షించబడ్డాయి మరియు ఫలితాలు అంజీర్ 3b లో చూపబడ్డాయి.స్వచ్ఛమైన PBSతో చికిత్స పొందిన సమూహంతో పోలిస్తే, ఫలితాలు చూపించాయి (i) G. డ్యూడెనాలిస్ తిత్తితో సోకిన ఎలుకల శరీర బరువు సంక్రమణ తర్వాత రోజు 3 నుండి 7వ రోజు వరకు తగ్గింది;(ii) MCC950 ఇన్హిబిటర్‌తో చికిత్స ఎలుకల శరీర బరువుపై గణనీయమైన ప్రభావాన్ని చూపలేదు..సింగిల్ ఇన్ఫెక్షన్ గ్రూప్‌తో పోలిస్తే, MCC950తో చికిత్స పొందిన డ్యూడెనల్ ఇన్‌ఫెక్షన్ గ్రూప్ యొక్క BW వివిధ స్థాయిలకు తగ్గింది (రోజు 1: ANOVA, F(3, 24) = 1.885, P = 0.0148; డే 2: ANOVA, F( 3, 24 ) = 0.4602, P<0.0001; రోజు 3: ANOVA, F(3, 24) = 0.8360, P = 0.0010; రోజు 4: ANOVA, F(3, 24) = 1.683, P = 0.0052; (3, 24)=0.6497, P=0.0645; రోజు 6: ANOVA, F(3, 24)=5.457, P=0.0175; రోజు 7: ANOVA, F(3, 24) = 2.893, P = 0.0202).డ్యూడెనల్ ఇన్ఫెక్షన్ యొక్క ప్రారంభ దశలలో (2-4 రోజులు) గణనీయమైన బరువు తగ్గకుండా NLRP3 ఇన్ఫ్లమేసమ్ ఎలుకలను రక్షిస్తుందని ఈ డేటా నిరూపిస్తుంది.మేము డ్యూడెనల్ లావేజ్ ద్రవంలో G. డ్యూడెనాలిస్ ట్రోఫోజోయిట్‌లను గుర్తించాలని లక్ష్యంగా పెట్టుకున్నాము మరియు ఫలితాలు మూర్తి 3cలో చూపబడ్డాయి.G. డ్యూడెనాలిస్ తిత్తి ఇన్ఫెక్షన్ సమూహంతో పోలిస్తే, NLRP3 ఇన్ఫ్లమేసమ్ (t(12) = 2.902, P = 0.0133)ను నిరోధించిన తర్వాత ఆంత్రమూలంలోని ట్రోఫోజోయిట్‌ల సంఖ్య గణనీయంగా పెరిగింది.PBS మరియు MCC950తో మాత్రమే చికిత్స చేయబడిన ప్రతికూల నియంత్రణతో పోలిస్తే, HEతో తడిసిన ఆంత్రమూల కణజాలం చూపించింది: (i) G. డ్యూడెనలిస్ తిత్తి ఇన్ఫెక్షన్ ఫలితంగా డ్యూడెనల్ విల్లీ (ANOVA, F(3, 24)=0.4903, P= 0.0488 ) మరియు క్రిప్ట్ క్షీణత (ANOVA, F(3, 24) = 0.4716, P = 0.0089);(ii) G. డ్యూడెనాలిస్ తిత్తులు సోకిన ఎలుకల నుండి డ్యూడెనమ్ మరియు MCC950 ఇన్హిబిటర్లతో చికిత్స పొందుతుంది.ఆంత్రమూలం విల్లీ దెబ్బతింది మరియు చనిపోయింది (ANOVA, F(3, 24) = 0.4903, P = 0.0144) క్షీణత మరియు క్రిప్ట్ బ్రాంచింగ్ (ANOVA, F(3, 24) = 0.4716, P = 0, 0481) (Fig. 3d- f) .G. డ్యూడెనాలిస్ యొక్క వ్యాధికారకతను తగ్గించడంలో NLRP3 ఇన్ఫ్లమేసమ్ పాత్ర పోషిస్తుందని ఈ ఫలితాలు సూచిస్తున్నాయి.
గియార్డియా డ్యూడెనమ్ ఇన్ఫెక్షన్‌లో NLRP3 ఇన్‌ఫ్లమేసమ్ పాత్ర.ఎలుకలను డ్యూడెనోకాకల్ తిత్తులతో (iv) గావేజ్ చేసి, ఆపై MCC950 (ip)తో లేదా లేకుండా చికిత్స చేశారు.PBS లేదా MCC950తో ఒకే చికిత్స సమూహాలు నియంత్రణలుగా ఉపయోగించబడ్డాయి.ప్రయోగాత్మక సమూహం మరియు చికిత్స నియమావళి.b వివిధ చికిత్స సమూహాలలో ప్రతి ఎలుకల శరీర బరువు 7 రోజులు పర్యవేక్షించబడింది.G. డ్యూడెనాలిస్ ఇన్ఫెక్షన్ గ్రూప్ మరియు G. డ్యూడెనాలిస్ + MCC950 ఇన్ఫెక్షన్ ట్రీట్‌మెంట్ గ్రూప్ మధ్య వ్యత్యాసం SPSS సాఫ్ట్‌వేర్ వెర్షన్ 22.0ని ఉపయోగించి t-టెస్ట్ ద్వారా విశ్లేషించబడింది.ఆస్టరిస్క్‌లు *P<0.05, **P <0.01, లేదా ***P<0.001 వద్ద ముఖ్యమైన తేడాలను సూచిస్తాయి.c డ్యూడెనల్ లావేజ్ ద్రవంలో ట్రోఫోజోయిట్‌ల సంఖ్యను లెక్కించడం ద్వారా పరాన్నజీవి లోడ్ నిర్ణయించబడుతుంది.G. డ్యూడెనాలిస్ ఇన్ఫెక్షన్ గ్రూప్ మరియు G. డ్యూడెనాలిస్ + MCC950 ఇన్ఫెక్షన్ ట్రీట్‌మెంట్ గ్రూప్ మధ్య వ్యత్యాసం SPSS సాఫ్ట్‌వేర్ వెర్షన్ 22.0ని ఉపయోగించి t-టెస్ట్ ద్వారా విశ్లేషించబడింది.ఆస్టరిస్క్‌లు *P <0.05 వద్ద ముఖ్యమైన తేడాలను సూచిస్తాయి.d హెమటాక్సిలిన్ మరియు ఇయోసిన్ (H&E) డ్యూడెనల్ హిస్టోపాథాలజీ యొక్క స్టెయినింగ్ ఫలితాలు.ఎరుపు బాణాలు విల్లీకి నష్టాన్ని సూచిస్తాయి, ఆకుపచ్చ బాణాలు క్రిప్ట్‌లకు నష్టాన్ని సూచిస్తాయి.స్కేల్ బార్: 100 µm.e, f డ్యూడెనల్ విల్లస్ ఎత్తు మరియు మౌస్ క్రిప్ట్ ఎత్తు యొక్క గణాంక విశ్లేషణ.ఆస్టరిస్క్‌లు *P <0.05 మరియు ** P <0.01 వద్ద ముఖ్యమైన తేడాలను సూచిస్తాయి.ఫలితాలు 7 స్వతంత్ర జీవ ప్రయోగాల నుండి తీసుకోబడ్డాయి.BW, శరీర బరువు;ig, ఇంట్రాగాస్ట్రిక్ డెలివరీ మార్గం;ip, ఇంట్రాపెరిటోనియల్ డెలివరీ మార్గం;ns, ముఖ్యమైనది కాదు (P > 0.05);PBS, ఫాస్ఫేట్ బఫర్డ్ సెలైన్;WT, అడవి రకం
IL-1β యొక్క స్రావం మంట క్రియాశీలత యొక్క ముఖ్య లక్షణం.G. duodenalis alpha-2 giardine మరియు alpha-7.3 giardine vivoలో NLRP3 హోస్ట్ ఇన్‌ఫ్లమేసమ్‌ని యాక్టివేట్ చేస్తాయో లేదో తెలుసుకోవడానికి, మేము చికిత్స చేయని WT ఎలుకలు (షామ్ గ్రూప్) మరియు NLRP3 ఇన్‌ఫ్లమేసమ్-బ్లాక్డ్ ఎలుకలు (MCC950 నిరోధిత చికిత్స సమూహం) ఉపయోగించాము.ప్రయోగం యొక్క వివరణాత్మక పథకం అంజీర్ 4aలో చూపబడింది.ప్రయోగాత్మక సమూహాలలో పిబిఎస్, జి. డ్యూడెనాలిస్ సిస్ట్ ట్రీట్‌మెంట్, పిసిడిఎన్ఎ3.1 యొక్క ఇంట్రామస్కులర్ ఇంజెక్షన్ మరియు పిసిడిఎన్ఎ 3.1(+)-ఆల్ఫా-2 గియార్డిన్ లేదా పిసిడిఎన్ఎ3.1-ఆల్ఫా-7.3 గియార్డిన్ యొక్క ఇంట్రామస్కులర్ ఇంజెక్షన్ ద్వారా పిబిఎస్‌తో చికిత్స చేయబడిన ఎలుకలు ఉన్నాయి.రీకాంబినెంట్ ప్లాస్మిడ్ యొక్క ఇంట్రామస్కులర్ అడ్మినిస్ట్రేషన్ తర్వాత 7 వ రోజు, సీరం సేకరించబడింది మరియు ప్రతి సమూహంలో IL-1β స్థాయి నిర్ణయించబడుతుంది.మూర్తి 4bలో చూపినట్లుగా, MOCK సమూహంలో: (i) PBS సమూహంతో పోలిస్తే, pcDNA3.1 చికిత్స IL-1β స్రావం (ANOVA, F(4.29)=4.062, P=0.9998)పై గణనీయమైన ప్రభావాన్ని చూపలేదు, అయితే, G. డ్యూడెనాలిస్ సిస్ట్ గ్రూప్ (ANOVA, F(4, 29) = 4.062, P = 0.0002), (ii) pcDNA3.1-alpha-2 giardine మరియు pcDNA3లో IL-β స్రావం గణనీయంగా పెరిగింది.1- ఆల్ఫా-7.3 గియార్డిన్ యొక్క ఇంట్రామస్కులర్ ఇంజెక్షన్ సీరం IL-1β స్థాయిలను గణనీయంగా పెంచింది (ANOVA, F(4, 29) = 4.062, P<0.0001);(iii) pcDNA3.1-alpha-2 giardine intramuscular injection group (ANOVA, F(4, 29) = 4.062, P = 0.0333)లో pcDNA3.1-alpha-7,3 గియార్డిన్ అధిక స్థాయి IL -1β స్రావాన్ని ప్రేరేపించింది. .MCC950 చికిత్స సమూహం మరియు MOCK సమూహంలోని ప్రతి సమూహంతో పోలిస్తే: (i) MCC950 ఇన్హిబిటర్‌ను నిరోధించిన తర్వాత PBS నియంత్రణ సమూహం మరియు pcDNA3.1 నియంత్రణ సమూహంలో IL-1β స్రావం స్థాయిలు కొంత వరకు తగ్గాయి, కానీ తేడా లేదు ముఖ్యమైనది (PBS: ANOVA, F (9, 58) = 3.540, P = 0.4912 pcDNA3.1: ANOVA, F(9, 58) = 3.540, P = 0.5949);(ii) MCC950ని బ్లాక్ చేసిన తర్వాత., IL-1β స్రావం G. డ్యూడెనాలిస్ తిత్తి-సోకిన సమూహం, pcDNA3.1-ఆల్ఫా-2 గియార్డిన్ సమూహం మరియు pcDNA3.1-ఆల్ఫా-7.3 గియార్డిన్ సమూహంలో (G. డ్యూడెనాలిస్: ANOVA, F(9) గణనీయంగా తగ్గింది. , 58) = 3.540 , P = 0.0120 ) = 3.540, P = 0.0164).ఈ ఫలితాలు ఆల్ఫా-2 గియార్డిన్ మరియు ఆల్ఫా-7.3 గియార్డిన్ వివోలో ఎన్‌ఎల్‌ఆర్‌పి3 ఇన్‌ఫ్లమేసమ్ క్రియాశీలతను మధ్యవర్తిత్వం చేస్తాయని సూచిస్తున్నాయి.
pcDNA3.1(+)-గియార్డిన్‌లు వివోలో NLRP3 హోస్ట్ ఇన్‌ఫ్లమేసమ్‌ని యాక్టివేట్ చేస్తాయి.ఎలుకలు రీకాంబినెంట్ యూకారియోటిక్ ఎక్స్‌ప్రెషన్ ప్లాస్మిడ్ pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine లేదా pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 గియార్డిన్‌తో రోగనిరోధక శక్తిని పొందాయి మరియు తర్వాత MCC950 (ip; MCC950 గ్రూప్) లేదా (డమ్మీ గ్రూప్)తో చికిత్స చేయబడ్డాయి. )PBS లేదా pcDNA3.1(+) ప్లాస్మిడ్ చికిత్స సమూహం ప్రతికూల నియంత్రణగా ఉపయోగించబడింది, G. డ్యూడెనాలిస్ తిత్తి చికిత్స సమూహం సానుకూల నియంత్రణగా ఉపయోగించబడింది.ప్రయోగాత్మక సమూహం మరియు చికిత్స నియమావళి.b ఎలుకలలో IL-1β యొక్క సీరం స్థాయిలు ELISA పరీక్ష ద్వారా 7వ రోజున కొలుస్తారు.MOCK సమూహంలోని సమూహాల మధ్య తేడాలు వన్-వే ANOVA ఉపయోగించి విశ్లేషించబడ్డాయి మరియు MOCK సమూహం మరియు MCC950 సమూహం మధ్య తేడాలు SPSS సాఫ్ట్‌వేర్ వెర్షన్ 22.0 యొక్క t-పరీక్షను ఉపయోగించి విశ్లేషించబడ్డాయి.MOCK సమూహంలో చికిత్స సమూహాల మధ్య ముఖ్యమైన వ్యత్యాసాలను ఆస్టరిస్క్‌లు సూచిస్తాయి, *P <0.05 మరియు ***P <0.001;డాలర్ సంకేతాలు ($) MOCK సమూహంలోని ప్రతి సమూహం మరియు P<0.05 వద్ద MCC950 సమూహం మధ్య ముఖ్యమైన వ్యత్యాసాలను సూచిస్తాయి.ఏడు స్వతంత్ర జీవ ప్రయోగాల ఫలితాలు.i, ఇంట్రామస్కులర్ ఇంజెక్షన్, ns, ముఖ్యమైనది కాదు (P > 0.05)
G. డ్యూడెనాలిస్ ఇన్ఫెక్టివిటీపై NLRP3 హోస్ట్ ఇన్ఫ్లమేసమ్ ఆల్ఫా-2 మరియు ఆల్ఫా-7.3 గియార్డిన్-మెడియేటెడ్ యాక్టివేషన్ ప్రభావాన్ని పరిశోధించడానికి, మేము WT C57BL/6 ఎలుకలను ఉపయోగించాము మరియు ఆల్ఫా-2 గియార్డిన్ మరియు ఆల్ఫా-7.3 గియార్డిన్‌లను ఇంజెక్ట్ చేసాము.ప్లాస్మిడ్ జి. డ్యూడెనాలిస్ తిత్తి యొక్క గ్యాస్ట్రిక్ ట్యూబ్ ద్వారా 3 రోజుల తర్వాత ఇంట్రామస్కులర్‌గా ఇంజెక్ట్ చేయబడింది, ఆ తర్వాత ఎలుకలను 7 రోజులు గమనించారు.ప్రయోగం యొక్క వివరణాత్మక పథకం అంజీర్ 5aలో చూపబడింది.ప్రతి ఎలుక యొక్క శరీర బరువు ప్రతిరోజూ కొలుస్తారు, గ్యాస్ట్రిక్ ట్యూబ్ ద్వారా పరిపాలన తర్వాత 7 వ రోజున తాజా డ్యూడెనల్ కణజాలం యొక్క నమూనాలను సేకరించారు, ట్రోఫోజోయిట్‌ల సంఖ్యను కొలుస్తారు మరియు హిస్టోపాథలాజికల్ మార్పులు గమనించబడ్డాయి.మూర్తి 5 బిలో చూపినట్లుగా, పెరుగుతున్న దాణా సమయంతో, ప్రతి సమూహంలోని ఎలుకల BW క్రమంగా పెరిగింది.G. డ్యూడెనాలిస్ తిత్తుల ఇంట్రాగాస్ట్రిక్ పరిపాలన తర్వాత 3వ రోజున ఎలుకల MT తగ్గడం ప్రారంభమైంది, ఆపై క్రమంగా పెరిగింది.ఆల్ఫా-2 గియార్డిన్ మరియు ఆల్ఫా7.3 గియార్డిన్ యొక్క ఇంట్రామస్కులర్ ఇంజెక్షన్ ద్వారా ప్రేరేపించబడిన NLRP3 ఇన్ఫ్లమేసమ్ యొక్క క్రియాశీలత ఎలుకలలో బరువు తగ్గడాన్ని గణనీయంగా తగ్గించింది (రోజు 1: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 1. = 0 .9754 రోజు 1: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30)=1.399, P=0.9987 డే 2: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA, F( 4, 30) = 0.3172, P = 0.9979; రోజు 2: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.3172, P = 0.8409 4 , F(4, 30) = 0.5620, P = 0.0012, రోజు 4: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.5620, P <0.0001, రోజు 5: pcDNA3.1-alpha 2 గియార్డిన్, ANOVA, F(4, 30) = 0.9728, P <0.0001 రోజు 5: pcDNA3.1-alpha -7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.9728, P <0.0001 Day 6: pcDNA ఆల్ఫా-2 గియార్డిన్, ANOVA, F(4, 30) = 0.7154, P = 0.0012, డే 6: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.7154, P = 0.0006;రోజు 7: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.5369, P<0.0001 Day 7: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4 , 30) = 0.5369, P <0.0001).డ్యూడెనమ్‌లో పరాన్నజీవి లోడ్ అంచనా వేయబడింది (Fig. 5c).చికిత్స చేయని సానుకూల నియంత్రణ మరియు ఖాళీ pcDNA3.1 వెక్టర్‌తో ఇంజెక్ట్ చేయబడిన సమూహంతో పోలిస్తే, α-2 గియార్డిన్ మరియు α-7,3 గియార్డిన్ (pcDNA3.1-ఆల్ఫా)తో ఇంజెక్ట్ చేయబడిన సమూహాలలో G. డ్యూడెనాలిస్ ట్రోఫోజోయిట్‌ల సంఖ్య గణనీయంగా తగ్గింది. -2 గియార్డిన్ : ANOVA, F(3, 24) = 1.209, P = 0.0002, pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 1.209, P<0.0001).అదనంగా, గియార్డిన్ ఆల్ఫా-2 (ANOVA, F(3, 24) = 1.209, P = 0.0081) కంటే జియార్డిన్ ఆల్ఫా-7.3 ఎలుకలలో మరింత రక్షణగా ఉంది.HE స్టెయినింగ్ యొక్క ఫలితాలు అంజీర్లో చూపబడ్డాయి.5d-f.ఆల్ఫా-2 గియార్డిన్ మరియు ఆల్ఫా-7.3 గియార్డిన్‌తో ఇంజెక్ట్ చేయబడిన ఎలుకలు తక్కువ ఆంత్రమూల కణజాల గాయాలు కలిగి ఉంటాయి, ఇవి జి. డ్యూడెనాలిస్‌తో ఇంజెక్ట్ చేయబడిన ఎలుకలు మరియు ఖాళీ pcDNA3 వెక్టర్ .1 జూమ్‌తో కలిపి G. డ్యూడెనాలిస్‌తో ఇంజెక్ట్ చేయబడిన ఎలుకలతో పోలిస్తే, విలస్ దెబ్బతినడం ద్వారా వ్యక్తమవుతాయి.(pcDNA3.1-alpha-2 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 2.466, P = 0.0035 లేదా P = 0.0068; pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 2.466, = 0.0028 లేదా P = 0.0055) మరియు తగ్గిన క్రిప్ట్ క్షీణత (pcDNA3.1-alpha-2 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 1.470, P = 0.0264 లేదా P = 0.0158; pcDNA3.3.1-alphaardine:ANO. , F(3, 24) = 1.470, P = 0.0371 లేదా P = 0.0191).ఈ ఫలితాలు ఆల్ఫా-2 గియార్డిన్ మరియు ఆల్ఫా-7,3 గియార్డిన్‌లు వివోలో ఎన్‌ఎల్‌ఆర్‌పి3 ఇన్‌ఫ్లమేసమ్‌ని యాక్టివేట్ చేయడం ద్వారా జి. డ్యూడెనాలిస్ ఇన్‌ఫెక్టివిటీని తగ్గిస్తాయని సూచిస్తున్నాయి.
G. డ్యూడెనాలిస్ ఇన్ఫెక్షన్‌లో pcDNA3.1(+)-గియార్డిన్స్ పాత్ర.ఎలుకలు రీకాంబినెంట్ యూకారియోటిక్ ఎక్స్‌ప్రెషన్ ప్లాస్మిడ్‌లు pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine లేదా pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 గియార్డిన్‌తో రోగనిరోధక శక్తిని పొందాయి మరియు తర్వాత G. డ్యూడెనాలిస్ సిస్ట్‌లతో (ig) సవాలు చేయబడ్డాయి.PBS సమూహం మరియు pcDNA3.1(+) + డ్యూడెనల్ తిత్తి చికిత్స సమూహం ప్రతికూల నియంత్రణ సమూహాలుగా ఉపయోగించబడ్డాయి మరియు డ్యూడెనల్ తిత్తి చికిత్స సమూహం సానుకూల నియంత్రణ సమూహంగా ఉపయోగించబడింది.ప్రయోగాత్మక సమూహం మరియు చికిత్స నియమావళి.b వివిధ చికిత్స సమూహాలలో ప్రతి MT ఎలుకలు ఛాలెంజ్ తర్వాత 7 రోజులు పర్యవేక్షించబడ్డాయి.ఆస్టరిస్క్‌లు G. duodenalis సమూహం మరియు pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine సమూహం, *P <0.05, **P <0.01, మరియు ***P <0.001 సమూహాల మధ్య ముఖ్యమైన వ్యత్యాసాలను సూచిస్తాయి;డాలర్ గుర్తు ($) G. డ్యూడెనాలిస్ యొక్క ప్రతి సమూహం మరియు pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 జార్డిన్ సమూహం, $$P<0.01 మరియు $$$P<0.001 మధ్య గణనీయమైన వ్యత్యాసాన్ని సూచిస్తుంది.c ఆంత్రమూలం (3 సెం.మీ పొడవు) నుండి 1 ml డ్యూడెనల్ లావేజ్‌లో ట్రోఫోజోయిట్‌ల సంఖ్యను లెక్కించడం ద్వారా పరాన్నజీవి లోడ్ నిర్ణయించబడుతుంది మరియు ఆంత్రమూలం యొక్క సెం.మీ.కి పరాన్నజీవుల సంఖ్యగా వ్యక్తీకరించబడుతుంది.G. డ్యూడెనాలిస్ ఇన్ఫెక్షన్ గ్రూప్, pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine group మరియు pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 గియార్డిన్ గ్రూప్ మధ్య తేడాలు SPSS సాఫ్ట్‌వేర్ వెర్షన్ 22.0ని ఉపయోగించి వన్-వే ANOVA ద్వారా విశ్లేషించబడ్డాయి.ఆస్టరిస్క్‌లు **P<0.01 మరియు ***P<0.001 వద్ద ముఖ్యమైన తేడాలను సూచిస్తాయి.d డుయోడెనమ్‌లో హిస్టోపాథలాజికల్ మార్పులు.ఎరుపు బాణాలు విల్లీకి నష్టాన్ని సూచిస్తాయి, ఆకుపచ్చ బాణాలు క్రిప్ట్‌లకు నష్టాన్ని సూచిస్తాయి.స్కేల్ బార్: 100 µm.e, f మౌస్ డ్యూడెనల్ విల్లస్ ఎత్తు (e) మరియు క్రిప్ట్ ఎత్తు (f) యొక్క గణాంక విశ్లేషణ.Figure 1dలోని సమూహాల మధ్య తేడాలు SPSS సాఫ్ట్‌వేర్ వెర్షన్ 22.0ని ఉపయోగించి వన్-వే ANOVA ద్వారా విశ్లేషించబడ్డాయి.ఆస్టరిస్క్‌లు *P <0.05 మరియు ** P <0.01 వద్ద ముఖ్యమైన తేడాలను సూచిస్తాయి.ఏడు స్వతంత్ర జీవ ప్రయోగాల ఫలితాలు.ns, ముఖ్యమైనది కాదు (P > 0.05)
గియార్డియా డ్యూడెనమ్ అనేది గియార్డియాసిస్‌కు కారణమయ్యే మానవులు మరియు ఇతర క్షీరదాల పేగు పరాన్నజీవి.2004లో, ఇది 6 సంవత్సరాలలో అధిక ప్రాబల్యం కారణంగా WHO నిర్లక్ష్య వ్యాధుల చొరవలో చేర్చబడింది, ప్రత్యేకించి తక్కువ సామాజిక ఆర్థిక స్థితి [32] ఉన్న సమాజాలలో.G. డ్యూడెనాలిస్ సంక్రమణకు రోగనిరోధక ప్రతిస్పందనలో సహజమైన రోగనిరోధక వ్యవస్థ కీలక పాత్ర పోషిస్తుంది.మౌస్ మాక్రోఫేజ్‌లు ఎక్స్‌ట్రాసెల్యులర్ ట్రాప్‌లను విడుదల చేయడం ద్వారా జి. డ్యూడెనాలిస్‌ను చుట్టుముట్టి చంపేస్తాయని నివేదించబడింది [33].మా మునుపటి అధ్యయనాలు G. duodenalis, నాన్-ఇన్వాసివ్ ఎక్స్‌ట్రాసెల్యులర్ పరాన్నజీవి, హోస్ట్ ఇన్‌ఫ్లమేటరీ ప్రతిస్పందనలను నియంత్రించడానికి మౌస్ మాక్రోఫేజ్‌లలో p38 MAPK, ERK, NF-κB p65 మరియు NLRP3 ఇన్ఫ్లమేటరీ సిగ్నలింగ్ పాత్‌వేలను యాక్టివేట్ చేస్తుంది మరియు విడుదల చేసిన GEV ఈ ప్రక్రియను మెరుగుపరుస్తుంది.13], 24].అయినప్పటికీ, GEVలో NLRP3 ఇన్‌ఫ్లమేసమ్-రెగ్యులేటెడ్ ఇన్‌ఫ్లమేషన్‌లో పాల్గొన్న ఖచ్చితమైన PAMPలు మరియు గియార్డియాసిస్‌లో NLRP3 ఇన్‌ఫ్లమేసమ్ పాత్ర స్పష్టంగా తెలియాల్సి ఉంది.ఈ రెండు ప్రశ్నలపై వెలుగు నింపడానికి, మేము ఈ అధ్యయనాన్ని నిర్వహించాము.
NLRP3 ఇన్ఫ్లమేసమ్ రోగనిరోధక కణాల సైటోప్లాజంలో ఉంది మరియు యూరిక్ యాసిడ్ స్ఫటికాలు, టాక్సిన్స్, బ్యాక్టీరియా, వైరస్లు మరియు పరాన్నజీవులు వంటి వివిధ కణాల ద్వారా సక్రియం చేయబడుతుంది.బాక్టీరియా అధ్యయనాలలో, టాక్సిన్స్ ఇన్ఫ్లమేటరీ సెన్సార్లను సక్రియం చేసే కీ PAMP లుగా గుర్తించబడ్డాయి, ఇది వాపు మరియు కణాల మరణానికి దారితీస్తుంది [34].స్టెఫిలోకాకస్ ఆరియస్ నుండి హెమోలిసిన్ [35] మరియు ఎస్చెరిచియా కోలి [36], ఎంట్రోటాక్సిన్ (NHE) [37] నుండి హెమోలిసిన్ BL (HBL) వంటి కొన్ని నిర్మాణాత్మకంగా విభిన్నమైన టాక్సిన్స్, NLRP3 ఇన్ఫ్లమేషన్ యొక్క క్రియాశీలతను ప్రేరేపిస్తాయి.వైరల్ అధ్యయనాలు SARS-COV-2 ఎన్వలప్ (E) ప్రోటీన్ [38] మరియు జికా వైరస్ NS5 ప్రోటీన్ [39] వంటి వైరలెన్స్ ప్రోటీన్‌లు NLRP3 రిసెప్టర్ ద్వారా గుర్తించబడిన ముఖ్యమైన PAMPలు అని చూపించాయి.పరాన్నజీవి అధ్యయనాలలో, అనేక పరాన్నజీవులు హోస్ట్ ఇన్ఫ్లమేసమ్ యాక్టివేషన్‌తో సంబంధం కలిగి ఉన్నట్లు నివేదించబడింది, ఉదాహరణకు టోక్సోప్లాస్మా గోండి, ట్రైకోమోనాస్ వాజినాలిస్ [40], ట్రిపనోసోమా క్రూజీ [41] మరియు లీష్మానియా [42].టాక్సోప్లాస్మా గోండి యొక్క వైరలెన్స్‌తో అనుబంధించబడిన దట్టమైన గ్రాన్యూల్ ప్రోటీన్లు GRA35, GRA42 మరియు GRA43, లూయిస్ ఎలుక మాక్రోఫేజ్‌లలో పైరోప్టోసిస్‌ను ప్రేరేపించడానికి అవసరం [43].అదనంగా, కొన్ని లీష్మానియా అధ్యయనాలు పరాన్నజీవి పొర లిపోఫాస్ఫోగ్లైకాన్ [44] లేదా జింక్ మెటాలోప్రొటీజ్ [45] వంటి NLRP3 ఇన్ఫ్లమేసమ్‌లో పాల్గొన్న వ్యక్తిగత అణువులపై దృష్టి సారించాయి.అనెక్సిన్ లాంటి ఆల్ఫా-గియార్డిన్ కుటుంబంలోని జన్యువులలో, ఆల్ఫా-1 గియార్డిన్ ఒక మౌస్ మోడల్‌లో G. డ్యూడెనాలిస్‌కు వ్యతిరేకంగా రక్షణను అందించే సంభావ్య టీకా అభ్యర్థిగా చూపబడింది [18].మా అధ్యయనంలో, మేము G. డ్యూడెనాలిస్ వైరలెన్స్ కారకాలు ఆల్ఫా-2 మరియు ఆల్ఫా-7,3 గియార్డిన్‌లను ఎంచుకున్నాము, ఇవి గియార్డియాకు ప్రత్యేకమైనవి కానీ సాపేక్షంగా తక్కువగా నివేదించబడ్డాయి.ఇన్ఫ్లమేషన్ యాక్టివేషన్ యొక్క విశ్లేషణ కోసం ఈ రెండు లక్ష్య జన్యువులు pcDNA3.1(+) యూకారియోటిక్ ఎక్స్‌ప్రెషన్ సిస్టమ్ వెక్టర్‌లోకి క్లోన్ చేయబడ్డాయి.
మా మౌస్ మోడల్‌లో, క్లీవ్డ్ కాస్‌పేస్ శకలాలు ఇన్‌ఫ్లమేటరీ యాక్టివేషన్‌కు గుర్తులుగా పనిచేస్తాయి.ఉద్దీపన తర్వాత, NLRP3 ASCతో సంకర్షణ చెందుతుంది, ప్రోకాస్‌పేస్‌లను నియమిస్తుంది మరియు ప్రో-IL-1β మరియు ప్రో-IL-18ని పరిపక్వ IL-1β మరియు IL-18గా విడదీసే క్రియాశీల కాస్‌పేస్‌లను ఉత్పత్తి చేస్తుంది, వరుసగా -18.ఇన్‌ఫ్లమేటరీ కాస్‌పేస్‌లు (కాస్‌పేస్‌లు-1, -4, -5 మరియు -11) అనేది సిస్టీన్ ప్రోటీజ్‌ల యొక్క సంరక్షించబడిన కుటుంబం, ఇవి సహజమైన రక్షణకు కీలకం మరియు వాపు మరియు ప్రోగ్రామ్ చేయబడిన సెల్ డెత్‌లో పాల్గొంటాయి [46].కాస్పేస్-1 కానానికల్ ఇన్‌ఫ్లమేసమ్‌ల ద్వారా సక్రియం చేయబడుతుంది [47], అయితే కాస్‌పేస్‌లు-4, -5 మరియు -11 విలక్షణమైన ఇన్‌ఫ్లమేసమ్‌లు ఏర్పడే సమయంలో క్లీవ్ చేయబడతాయి [48].ఈ అధ్యయనంలో, మేము మౌస్ పెరిటోనియల్ మాక్రోఫేజ్‌లను మోడల్‌గా ఉపయోగించాము మరియు G. డ్యూడెనాలిస్ ఇన్‌ఫెక్షన్ అధ్యయనాలలో హోస్ట్ NLRP3 ఇన్ఫ్లమేషన్ యాక్టివేషన్‌కు గుర్తుగా p20 కాస్‌పేస్-1 క్లీవ్డ్ కాస్‌పేస్-1ని పరిశోధించాము.ఇన్ఫ్లమేషన్ యొక్క సాధారణ క్రియాశీలతకు అనేక ఆల్ఫా-గియార్డిన్‌లు కారణమని ఫలితాలు చూపించాయి, ఇది బ్యాక్టీరియా మరియు వైరస్‌లలో పాల్గొన్న కీ వైరలెన్స్ అణువుల ఆవిష్కరణకు అనుగుణంగా ఉంటుంది.అయినప్పటికీ, మా అధ్యయనం ప్రాథమిక స్క్రీన్ మాత్రమే మరియు నాన్-క్లాసికల్ ఇన్‌ఫ్లమేసమ్‌లను సక్రియం చేయగల ఇతర అణువులు ఉన్నాయి, ఎందుకంటే మా మునుపటి అధ్యయనం G. డ్యూడెనాలిస్ ఇన్‌ఫెక్షన్‌లో క్లాసికల్ మరియు నాన్-క్లాసికల్ ఇన్‌ఫ్లమేసమ్‌లను కనుగొంది [13].ఉత్పత్తి చేయబడిన p20 కాస్పేస్-1 NLRP3 ఇన్‌ఫ్లమేసమ్‌తో సంబంధం కలిగి ఉందో లేదో మరింత తెలుసుకోవడానికి, కీ మాలిక్యూల్ ప్రోటీన్ ఎక్స్‌ప్రెషన్ లెవల్స్ మరియు ASC ఒలిగోమెరైజేషన్ స్థాయిలను నిర్ణయించడానికి మేము ఆల్ఫా-2 మరియు ఆల్ఫా-7.3 గియార్డిన్‌లను మౌస్ పెరిటోనియల్ మాక్రోఫేజ్‌లుగా మార్చాము, α-గియార్డిన్‌లు రెండూ యాక్టివేట్ అవుతాయని నిర్ధారిస్తుంది. ఇన్ఫ్లమేసమ్ NLRP3.మా ఫలితాలు మాంకో-ప్రైఖోడా మరియు ఇతరుల నుండి కొద్దిగా భిన్నంగా ఉన్నాయి. వారు G. మురిస్ లేదా E. కోలి EPEC జాతులతో మాత్రమే కాకో-2 కణాల ఉద్దీపన NLRP3, ASC మరియు కాస్‌పేస్-1 యొక్క ఫ్లోరోసెన్స్ తీవ్రతను పెంచుతుందని నివేదించారు. గణనీయంగా లేనప్పటికీ, G. ​​మురిస్ మరియు E. కోలి యొక్క కాస్టిమ్యులేషన్ మూడు ప్రోటీన్ల స్థాయిలను ఎలా పెంచింది [49].గియార్డియా జాతులు, కణ రేఖలు మరియు ప్రాథమిక కణాల ఎంపికలో తేడాల వల్ల ఈ వ్యత్యాసం ఉండవచ్చు.మేము 5-వారాల వయస్సు గల ఆడ WT C57BL/6 ఎలుకలలో MCC950ని ఉపయోగించి వివో పరీక్షలలో కూడా ప్రదర్శించాము, ఇవి G. డ్యూడెనాలిస్‌కు ఎక్కువ అవకాశం ఉంది.MCC950 అనేది నానోమోలార్ సాంద్రతలలో కానానికల్ మరియు నాన్-కానానికల్ NLRP3 యాక్టివేషన్‌ను నిరోధించే శక్తివంతమైన మరియు ఎంపిక చేయబడిన చిన్న అణువు NLRP3 నిరోధకం.MCC950 NLRP3 యాక్టివేషన్‌ను నిరోధిస్తుంది కానీ AIM2, NLRC4 మరియు NLRP1 ఇన్ఫ్లమేటరీ పాత్‌వేస్ లేదా TLR సిగ్నలింగ్ పాత్‌వేస్ [27] క్రియాశీలతను ప్రభావితం చేయదు.MCC950 NLRP3 యాక్టివేషన్‌ను బ్లాక్ చేస్తుంది కానీ NLRP3 ఇనిషియేషన్, K+ ఎఫ్లక్స్, Ca2+ ఇన్‌ఫ్లక్స్ లేదా NLRP3 మరియు ASC మధ్య పరస్పర చర్యను నిరోధించదు;బదులుగా, ఇది ASC ఒలిగోమెరైజేషన్ [27]ను నిరోధించడం ద్వారా NLRP3 ఇన్ఫ్లమేసమ్ యాక్టివేషన్‌ను నిరోధిస్తుంది.అందువల్ల, గియార్డిన్ ఇంజెక్షన్ తర్వాత NLRP3 ఇన్ఫ్లమేసమ్ పాత్రను నిర్ణయించడానికి మేము ఇన్ వివో అధ్యయనంలో MCC950ని ఉపయోగించాము.యాక్టివేటెడ్ కాస్‌పేస్-1 p10 ప్రో-ఇన్‌ఫ్లమేటరీ సైటోకిన్‌లను ప్రో-IL-1β మరియు ప్రో-IL-18ని పరిపక్వ IL-1β మరియు IL-18లోకి విడదీస్తుంది [50].ఈ అధ్యయనంలో, MCC950తో లేదా లేకుండా గియార్డిన్-చికిత్స చేసిన ఎలుకలలోని సీరం IL-1β స్థాయిలు NLRP3 ఇన్ఫ్లమేసమ్ సక్రియం చేయబడిందా అనేదానికి సూచికగా ఉపయోగించబడ్డాయి.ఊహించినట్లుగా, MCC950 చికిత్స సీరం IL-1β స్థాయిలను గణనీయంగా తగ్గించింది.G. డ్యూడెనాలిస్ గియార్డిన్ ఆల్ఫా-2 మరియు గియార్డిన్ ఆల్ఫా-7.3 NLRP3 మౌస్ ఇన్‌ఫ్లమేసమ్‌ను యాక్టివేట్ చేయగలవని ఈ డేటా స్పష్టంగా చూపిస్తుంది.
గత దశాబ్దంలో సేకరించబడిన ముఖ్యమైన డేటా IL-17A అనేది G. మురిస్‌కు వ్యతిరేకంగా రోగనిరోధక శక్తిని ప్రధాన నియంత్రకం అని నిరూపించింది, IL-17RA సిగ్నలింగ్‌ను ప్రేరేపిస్తుంది, యాంటీమైక్రోబయల్ పెప్టైడ్‌లను ఉత్పత్తి చేస్తుంది మరియు పూరక క్రియాశీలతను నియంత్రిస్తుంది [51].అయినప్పటికీ, గియార్డియా ఇన్ఫెక్షన్ యువకులలో చాలా తరచుగా సంభవిస్తుంది మరియు యువ ఎలుకలలో గియార్డియా సంక్రమణ దాని రక్షణ ప్రభావాన్ని [52] చూపడానికి IL-17A ప్రతిస్పందనను సక్రియం చేయదని నివేదించబడింది, పరిశోధకులు ఇతర ఇమ్యునోమోడ్యులేటరీ గియార్డియా కోసం వెతకడానికి ప్రేరేపిస్తుంది.హెల్మిన్త్ ఇన్ఫెక్షన్ యొక్క విధానాలు.G. మురిస్ E. coli EPEC ద్వారా NLRP3 ఇన్‌ఫ్లమేసమ్‌ను సక్రియం చేయగలదని ఇటీవలి అధ్యయనం యొక్క రచయితలు నివేదించారు, ఇది యాంటీమైక్రోబయల్ పెప్టైడ్‌ల ఉత్పత్తిని ప్రోత్సహిస్తుంది మరియు దాని జోడింపు సామర్థ్యాన్ని మరియు ప్రేగులలోని ట్రోఫోజోయిట్‌ల సంఖ్యను తగ్గిస్తుంది, తద్వారా పెద్దప్రేగు యొక్క తీవ్రతను తగ్గిస్తుంది. బాసిల్లి [49] వల్ల కలిగే వ్యాధులు.NLRP3 ఇన్ఫ్లమేసమ్ వివిధ వ్యాధుల అభివృద్ధిలో పాల్గొంటుంది.కణ మరణాన్ని నివారించడానికి సూడోమోనాస్ ఎరుగినోసా మాక్రోఫేజ్‌లలో ఆటోఫాగీని ప్రేరేపిస్తుందని అధ్యయనాలు చూపించాయి మరియు ఈ ప్రక్రియ NLRP3 ఇన్ఫ్లమేసమ్ [53] యొక్క క్రియాశీలతపై ఆధారపడి ఉంటుంది.N. కానినమ్ కోసం, NLRP3 ఇన్ఫ్లమేసమ్ యొక్క రియాక్టివ్ ఆక్సిజన్ జాతుల-మధ్యవర్తిత్వ క్రియాశీలత హోస్ట్‌లో దాని ప్రతిరూపణను పరిమితం చేస్తుంది, ఇది సంభావ్య చికిత్సా లక్ష్యం [9].పారాకోక్సిడియోడ్స్ బ్రాసిలియెన్సిస్ మౌస్ బోన్ మ్యారో-డెరైవ్డ్ డెండ్రిటిక్ కణాలలో NLRP3 ఇన్ఫ్లమేసమ్ యొక్క క్రియాశీలతను ప్రేరేపిస్తుందని కనుగొనబడింది, దీని ఫలితంగా ఇన్ఫ్లమేటరీ సైటోకిన్ IL-1β విడుదల అవుతుంది, ఇది హోస్ట్ డిఫెన్స్‌లో కీలక పాత్ర పోషిస్తుంది [10].L. అమెజోనెన్సిస్, L. మేజర్, L. బ్రెజిలియెన్సిస్ మరియు L. ఇన్ఫాంటమ్ చగాసితో సహా అనేక లీష్మానియా జాతులు, మాక్రోఫేజ్‌లలో NLRP3 మరియు ASC-ఆధారిత కాస్పేస్-1ని అలాగే లీష్మానియా ఇన్ఫెక్షన్‌ని సక్రియం చేస్తాయి.NLRP3/ASC/caspase-1 జన్యువు [11]లో లోపం ఉన్న ఎలుకలలో పరాన్నజీవి రెప్లికేషన్ మెరుగుపరచబడింది.జాంబోని మరియు ఇతరులు.లీష్మానియా ఇన్ఫెక్షన్ మాక్రోఫేజ్‌లలో NLRP3 ఇన్ఫ్లమేసమ్ యొక్క క్రియాశీలతను ప్రేరేపిస్తుందని నివేదించబడింది, ఇది కణాంతర పరాన్నజీవి ప్రతిరూపణను పరిమితం చేస్తుంది.అందువల్ల, లీష్మానియా NLRP3 క్రియాశీలతను ఎగవేత వ్యూహంగా నిరోధించవచ్చు.వివో అధ్యయనాలలో, NLRP3 ఇన్ఫ్లమేసమ్ లీష్మానియాను తొలగించడానికి దోహదపడింది, కానీ కణజాలాలను ప్రభావితం చేయలేదు [54].దీనికి విరుద్ధంగా, హెల్మిన్థియాసిస్ అధ్యయనాలలో, NLRP3 ఇన్ఫ్లమేసమ్ యొక్క క్రియాశీలత జీర్ణశయాంతర హెల్మిన్‌థియాసిస్‌కు వ్యతిరేకంగా హోస్ట్ యొక్క రక్షిత రోగనిరోధక శక్తిని అణిచివేసింది [12].ప్రపంచవ్యాప్తంగా అతిసారం కలిగించే ప్రధాన బ్యాక్టీరియాలలో షిగెల్లా ఒకటి.ఈ బ్యాక్టీరియా P2X7 రిసెప్టర్-మెడియేటెడ్ K+ ఎఫ్లక్స్, రియాక్టివ్ ఆక్సిజన్ జాతులు, లైసోసోమల్ ఆమ్లీకరణ మరియు మైటోకాన్డ్రియల్ డ్యామేజ్ ద్వారా IL-1β ఉత్పత్తిని ప్రేరేపించగలదు.NLRP3 ఇన్ఫ్లమేసమ్ ఫాగోసైటోసిస్ మరియు షిగెల్లాకు వ్యతిరేకంగా మాక్రోఫేజ్‌ల బాక్టీరిసైడ్ కార్యకలాపాలను ప్రతికూలంగా నియంత్రిస్తుంది [55].ప్లాస్మోడియం అధ్యయనాలు AIM2, NLRP3 లేదా కాస్‌పేస్-1 లోపం ఉన్న ఎలుకలు ప్లాస్మోడియం సోకినవి అధిక స్థాయిలో టైప్ 1 ఇంటర్‌ఫెరాన్‌ను ఉత్పత్తి చేస్తాయని మరియు ప్లాస్మోడియం ఇన్‌ఫెక్షన్‌కు ఎక్కువ నిరోధకతను కలిగి ఉన్నాయని తేలింది [56].అయినప్పటికీ, ఎలుకలలో NLRP3 మంట యొక్క వ్యాధికారక క్రియాశీలతను ప్రేరేపించడంలో ఆల్ఫా-2 గియార్డిన్ మరియు ఆల్ఫా-7.3 గియార్డిన్ పాత్ర అస్పష్టంగా ఉంది.
ఈ అధ్యయనంలో, MCC950 ద్వారా NLRP3 ఇన్‌ఫ్లమేసమ్‌ను నిరోధించడం BWని తగ్గించింది మరియు ఎలుకలలో పేగు లావేజ్ ద్రవంలో ట్రోఫోజోయిట్‌ల సంఖ్యను పెంచింది, ఫలితంగా డ్యూడెనల్ కణజాలంలో మరింత తీవ్రమైన రోగలక్షణ మార్పులు వచ్చాయి.ఆల్ఫా-2 గియార్డిన్ మరియు ఆల్ఫా-7.3 గియార్డిన్ హోస్ట్ మౌస్ NLRP3 ఇన్‌ఫ్లమేసమ్‌ను యాక్టివేట్ చేస్తాయి, మౌస్ శరీర బరువును పెంచుతాయి, పేగు లావేజ్ ద్రవంలో ట్రోఫోజోయిట్‌ల సంఖ్యను తగ్గిస్తాయి మరియు పాథలాజికల్ డ్యూడెనల్ గాయాలను ఉపశమనం చేస్తాయి.ఈ ఫలితాలు G. డ్యూడెనాలిస్ NLRP3 హోస్ట్ ఇన్‌ఫ్లమేసమ్‌ను ఆల్ఫా-2 గియార్డిన్ మరియు ఆల్ఫా-7,3 గియార్డిన్ ద్వారా యాక్టివేట్ చేయగలదని, ఎలుకలలో G. డ్యూడెనాలిస్ యొక్క వ్యాధికారకతను తగ్గించవచ్చని ఈ ఫలితాలు సూచిస్తున్నాయి.
సమిష్టిగా, ఆల్ఫా-2 మరియు ఆల్ఫా-7.3 గియార్డిన్‌లు NLRP3 హోస్ట్ ఇన్‌ఫ్లమేసమ్ యొక్క క్రియాశీలతను ప్రేరేపిస్తాయని మరియు ఎలుకలలో G. డ్యూడెనాలిస్ యొక్క ఇన్ఫెక్టివిటీని తగ్గిస్తాయని మా ఫలితాలు చూపిస్తున్నాయి.అందువల్ల, ఈ అణువులు గియార్డియాసిస్ నివారణకు మంచి లక్ష్యాలు.
       Data supporting the results of this study can be obtained from the respective author at gongpt@jlu.edu.cn.
లియాంగ్ AKS, లియాంగ్ AAM, హువాంగ్ AHC, సెర్గి KM, కామ్ JKM.గియార్డియాసిస్: ఒక అవలోకనం.ప్యాట్ ఇన్‌ఫ్లమ్‌కు డ్రగ్స్‌కు ఎలర్జీ వస్తుందని ఇటీవల వెల్లడైంది.2019;13:134–43.
ఎస్కోబెడో AA, సిమెర్మాన్ S. గియార్డియాసిస్: ఫార్మాకోథెరపీ యొక్క సమీక్ష.ఫార్మసిస్ట్ యొక్క నిపుణుల అభిప్రాయం.2007;8: 1885–902.
టియాన్ హుఫెంగ్, చెన్ బిన్, వెన్ జియాన్ఫెంగ్.గియార్డియాసిస్, డ్రగ్ రెసిస్టెన్స్ మరియు కొత్త లక్ష్యాల ఆవిష్కరణ.రుగ్మత ఔషధ లక్ష్యాలను సోకుతుంది.2010;10:295–302.
వాంగ్ Z, జాంగ్ X, Xiao Yi, Zhang W, Wu X, Qin T, మొదలైనవి NLRP3 ఇన్ఫ్లమేసమ్ మరియు ఇన్ఫ్లమేటరీ వ్యాధులు.ఆక్సైడ్ మెడ్ సెల్ లాంగేవ్.2020;2020:4063562.
చెన్ GY, Núñez G. పేగు మంట మరియు క్యాన్సర్‌లో ఇన్‌ఫ్లమేసమ్ పాత్ర.గ్యాస్ట్రోఎంటరాలజీ.2011;141:1986–99.
Pellegrini C, Antonioli L, Lopez-Castejon G, Blandizzi C, Fornai M. రోగనిరోధక సహనం మరియు గట్ ఇన్ఫ్లమేషన్ యొక్క కూడలి వద్ద కానానికల్ మరియు వైవిధ్యమైన NLRP3 ఇన్ఫ్లమేసమ్ యాక్టివేషన్.ముందు రోగనిరోధక.2017;8:36.
లి ఎల్, వాంగ్ ఎక్స్‌సి, గాంగ్ పిటి, జాంగ్ ఎన్, జాంగ్ ఎక్స్, లి ఎస్, మరియు ఇతరులు.ROS-మధ్యవర్తిత్వ NLRP3 ఇన్ఫ్లమేసమ్ యాక్టివేషన్ N. కానినమ్ ఇన్ఫెక్షన్‌కు ప్రతిస్పందనగా ఉంటుంది.పరాన్నజీవి వెక్టర్.2020;13:449.