Nature.comని సందర్శించినందుకు ధన్యవాదాలు.మీరు ఉపయోగిస్తున్న బ్రౌజర్ సంస్కరణకు పరిమిత CSS మద్దతు ఉంది.ఉత్తమ అనుభవం కోసం, మీరు నవీకరించబడిన బ్రౌజర్‌ను ఉపయోగించాల్సిందిగా మేము సిఫార్సు చేస్తున్నాము (లేదా Internet Explorerలో అనుకూలత మోడ్‌ని నిలిపివేయండి).ఈ సమయంలో, నిరంతర మద్దతును నిర్ధారించడానికి, మేము సైట్‌ను స్టైల్స్ మరియు జావాస్క్రిప్ట్ లేకుండా రెండర్ చేస్తాము.
టాక్సోప్లాస్మా గోండి అనేది కణాంతర ప్రోటోజోవాన్ పరాన్నజీవి, ఇది సోకిన హోస్ట్ యొక్క సూక్ష్మ వాతావరణాన్ని మాడ్యులేట్ చేస్తుంది మరియు మెదడు కణితి పెరుగుదల సంభవంతో సంబంధం కలిగి ఉంటుంది.ఈ అధ్యయనంలో, టాక్సోప్లాస్మా ఇన్ఫెక్షన్ నుండి ఎక్సోసోమల్ miRNA-21 మెదడు కణితి పెరుగుదలను ప్రోత్సహిస్తుందని మేము ఊహిస్తున్నాము.టోక్సోప్లాస్మా-సోకిన BV2 మైక్రోగ్లియా నుండి ఎక్సోసోమ్‌లు వర్గీకరించబడ్డాయి మరియు U87 గ్లియోమా కణాల అంతర్గతీకరణ నిర్ధారించబడింది.ఎక్సోసోమల్ మైక్రోఆర్ఎన్ఎ ఎక్స్‌ప్రెషన్ ప్రొఫైల్‌లు టాక్సోప్లాస్మా గోండి మరియు ట్యూమర్ సార్టింగ్‌తో అనుబంధించబడిన మైక్రోఆర్ఎన్ఎ మరియు మైక్రోఆర్ఎన్ఎ-21 ఎ-5 పి శ్రేణులను ఉపయోగించి విశ్లేషించబడ్డాయి.మేము ఎక్సోసోమ్‌లలోని miR-21 స్థాయిలను మార్చడం ద్వారా U87 గ్లియోమా కణాలలో కణితి-అనుబంధ జన్యువుల mRNA స్థాయిలను మరియు మానవ U87 గ్లియోమా సెల్ విస్తరణపై ఎక్సోసోమ్‌ల ప్రభావాన్ని కూడా పరిశోధించాము.టాక్సోప్లాస్మా గోండితో సోకిన U87 గ్లియోమా కణాల ఎక్సోసోమ్‌లలో, మైక్రోఆర్ఎన్ఎ-21 యొక్క వ్యక్తీకరణ పెరుగుతుంది మరియు యాంటిట్యూమర్ జన్యువుల (ఫాక్స్ఓ 1, పిటిఎన్ మరియు పిడిసిడి 4) కార్యాచరణ తగ్గించబడుతుంది.టోక్సోప్లాస్మా సోకిన BV2-ఉత్పన్న ఎక్సోసోమ్‌లు U87 గ్లియోమా కణాల విస్తరణను ప్రేరేపిస్తాయి.ఎక్సోసోమ్‌లు మౌస్ ట్యూమర్ మోడల్‌లో U87 కణాల పెరుగుదలను ప్రేరేపిస్తాయి.టోక్సోప్లాస్మా-సోకిన BV2 మైక్రోగ్లియాలో పెరిగిన ఎక్సోసోమల్ miR-21 యాంటిట్యూమర్ జన్యువులను తగ్గించడం ద్వారా U87 గ్లియోమా కణాలలో సెల్ గ్రోత్ ప్రమోటర్‌గా ముఖ్యమైన పాత్ర పోషిస్తుందని మేము సూచిస్తున్నాము.
2018లో ప్రపంచవ్యాప్తంగా 18.1 మిలియన్లకు పైగా అధునాతన క్యాన్సర్ కేసులు నిర్ధారణ అయ్యాయని అంచనా వేయబడింది, ప్రతి సంవత్సరం సుమారు 297,000 కేంద్ర నాడీ వ్యవస్థ కణితులు నిర్ధారణ అవుతున్నాయి (అన్ని కణితుల్లో 1.6%)1.మానవ మెదడు కణితులను అభివృద్ధి చేయడానికి ప్రమాద కారకాలు వివిధ రసాయన ఉత్పత్తులు, కుటుంబ చరిత్ర మరియు హెడ్ థెరప్యూటిక్ మరియు డయాగ్నొస్టిక్ పరికరాల నుండి అయోనైజింగ్ రేడియేషన్‌ను కలిగి ఉన్నాయని మునుపటి పరిశోధనలో తేలింది.అయితే, ఈ ప్రాణాంతకతలకు ఖచ్చితమైన కారణం తెలియదు.ప్రపంచవ్యాప్తంగా దాదాపు 20% క్యాన్సర్లు వైరస్లు, బాక్టీరియా మరియు పరాన్నజీవులతో సహా ఇన్ఫెక్షియస్ ఏజెంట్ల వల్ల సంభవిస్తాయి3,4.అంటు వ్యాధికారకాలు DNA మరమ్మత్తు మరియు కణ చక్రం వంటి హోస్ట్ సెల్ యొక్క జన్యు విధానాలకు అంతరాయం కలిగిస్తాయి మరియు దీర్ఘకాలిక మంట మరియు రోగనిరోధక వ్యవస్థకు హాని కలిగించవచ్చు.
హ్యూమన్ పాపిల్లోమావైరస్‌లు మరియు హెపటైటిస్ బి మరియు సి వైరస్‌లతో సహా మానవ క్యాన్సర్‌తో సంబంధం ఉన్న ఇన్ఫెక్షియస్ ఏజెంట్లు అత్యంత సాధారణ వైరల్ వ్యాధికారకాలు.మానవ క్యాన్సర్ అభివృద్ధిలో పరాన్నజీవులు కూడా సంభావ్య పాత్ర పోషిస్తాయి.అనేక పరాన్నజీవి జాతులు, అవి స్కిస్టోసోమా, ఒపిషోర్చిస్ వివెర్రిని, O. ఫెలినస్, క్లోనోర్చిస్ సినెన్సిస్ మరియు హైమెనోలెపిస్ నానా, వివిధ రకాల మానవ క్యాన్సర్ 6,7,8లో చిక్కుకున్నాయి.
టాక్సోప్లాస్మా గోండి అనేది కణాంతర ప్రోటోజోవాన్, ఇది సోకిన హోస్ట్ కణాల సూక్ష్మ వాతావరణాన్ని నియంత్రిస్తుంది.ఈ పరాన్నజీవి ప్రపంచ జనాభాలో దాదాపు 30% మందికి సోకుతుందని అంచనా వేయబడింది, దీని వలన మొత్తం జనాభా 9,10 ప్రమాదంలో పడింది.టోక్సోప్లాస్మా గోండి కేంద్ర నాడీ వ్యవస్థ (CNS)తో సహా ముఖ్యమైన అవయవాలకు సోకుతుంది మరియు ప్రాణాంతక మెనింజైటిస్ మరియు ఎన్సెఫాలిటిస్ వంటి తీవ్రమైన అనారోగ్యాలను కలిగిస్తుంది, ముఖ్యంగా రోగనిరోధక శక్తి లేని రోగులలో9.అయినప్పటికీ, రోగనిరోధక శక్తి లేని వ్యక్తులలో కణాల పెరుగుదల మరియు రోగనిరోధక ప్రతిస్పందనలను మాడ్యులేట్ చేయడం ద్వారా టాక్సోప్లాస్మా గోండి సోకిన హోస్ట్ యొక్క వాతావరణాన్ని కూడా మార్చగలదు, ఇది లక్షణరహిత దీర్ఘకాలిక సంక్రమణ నిర్వహణకు దారితీస్తుంది.ఆసక్తికరంగా, T. గాండి ప్రాబల్యం మరియు మెదడు కణితి సంభవం మధ్య సహసంబంధాన్ని బట్టి, కొన్ని నివేదికలు దీర్ఘకాలిక T. గాండి సంక్రమణ కారణంగా vivo హోస్ట్ పర్యావరణ మార్పులు కణితి సూక్ష్మ పర్యావరణాన్ని పోలి ఉన్నాయని సూచిస్తున్నాయి.
ఎక్సోసోమ్‌లను ఇంటర్ సెల్యులార్ కమ్యూనికేటర్స్ అని పిలుస్తారు, ఇవి పొరుగు కణాల నుండి ప్రోటీన్లు మరియు న్యూక్లియిక్ ఆమ్లాలతో సహా జీవసంబంధమైన కంటెంట్‌ను పంపిణీ చేస్తాయి16,17.కణితి సూక్ష్మ వాతావరణంలో యాంటీ-అపోప్టోసిస్, యాంజియోజెనిసిస్ మరియు మెటాస్టాసిస్ వంటి కణితి-సంబంధిత జీవ ప్రక్రియలను ఎక్సోసోమ్‌లు ప్రభావితం చేయగలవు.ప్రత్యేకించి, miRNAలు (miRNAలు), 22 న్యూక్లియోటైడ్‌ల పొడవు గల చిన్న నాన్-కోడింగ్ RNAలు, ముఖ్యమైన పోస్ట్-ట్రాన్స్క్రిప్షనల్ జన్యు నియంత్రకాలు, ఇవి miRNA- ప్రేరిత సైలెన్సింగ్ కాంప్లెక్స్ (miRISC) ద్వారా 30% కంటే ఎక్కువ మానవ mRNAని నియంత్రిస్తాయి.టాక్సోప్లాస్మా గోండి సోకిన హోస్ట్‌లలో miRNA వ్యక్తీకరణను నియంత్రించడం ద్వారా జీవ ప్రక్రియలకు అంతరాయం కలిగిస్తుంది.పరాన్నజీవి యొక్క మనుగడ వ్యూహాన్ని సాధించడానికి హోస్ట్ జీవ ప్రక్రియలను నియంత్రించడానికి హోస్ట్ miRNAలు ముఖ్యమైన సంకేతాలను కలిగి ఉంటాయి.అందువలన, T. gondii సంక్రమణపై హోస్ట్ miRNA ప్రొఫైల్‌లో మార్పులను అధ్యయనం చేయడం వలన హోస్ట్ మరియు T. గోండి మధ్య పరస్పర చర్యను మరింత స్పష్టంగా అర్థం చేసుకోవడంలో మాకు సహాయపడుతుంది.నిజానికి, తిరుజ్ఞానం మరియు ఇతరులు.15 T. గాండి కణితి పెరుగుదలతో సంబంధం ఉన్న నిర్దిష్ట హోస్ట్ miRNAలపై దాని వ్యక్తీకరణను మార్చడం ద్వారా మెదడు క్యాన్సర్ కారకాన్ని ప్రోత్సహిస్తుందని సూచించింది మరియు T. గోండి ప్రయోగాత్మక జంతువులలో గ్లియోమాస్‌కు కారణమవుతుందని కనుగొన్నారు.
ఈ అధ్యయనం టాక్సోప్లాస్మా BV2 సోకిన హోస్ట్ మైక్రోగ్లియాలో ఎక్సోసోమల్ miR-21 యొక్క మార్పుపై దృష్టి పెడుతుంది.FoxO1/p27 యొక్క కేంద్రకంలో నిలుపుదల కారణంగా U87 గ్లియోమా కణాల పెరుగుదలలో మార్చబడిన ఎక్సోసోమల్ miR-21 యొక్క పాత్రను మేము గమనించాము, ఇది అతిగా ఒత్తిడి చేయబడిన miR-21 యొక్క లక్ష్యం.
BV2 నుండి ఉద్భవించిన ఎక్సోసోమ్‌లు అవకలన సెంట్రిఫ్యూగేషన్‌ని ఉపయోగించి పొందబడ్డాయి మరియు సెల్యులార్ భాగాలు లేదా ఇతర వెసికిల్స్‌తో కలుషితం కాకుండా నిరోధించడానికి వివిధ పద్ధతుల ద్వారా ధృవీకరించబడ్డాయి.SDS-పాలియాక్రిలమైడ్ జెల్ ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్ (SDS-PAGE) BV2 కణాలు మరియు ఎక్సోసోమ్‌ల (Figure 1A) నుండి సేకరించిన ప్రోటీన్‌ల మధ్య విభిన్న నమూనాలను చూపించింది మరియు అలిక్స్ ఉనికి కోసం నమూనాలు అంచనా వేయబడ్డాయి, ఇది ఎక్సోసోమల్ ప్రోటీన్ మార్కర్లను వెస్ట్రన్ బ్లాటింగ్ ద్వారా విశ్లేషించబడింది.అలిక్స్ లేబులింగ్ ఎక్సోసోమ్ ప్రోటీన్‌లలో కనుగొనబడింది కానీ BV2 సెల్ లైసేట్ ప్రోటీన్‌లలో కాదు (Fig. 1B).అదనంగా, BV2 నుండి తీసుకోబడిన ఎక్సోసోమ్‌ల నుండి శుద్ధి చేయబడిన RNA బయోఅనలైజర్‌ని ఉపయోగించి విశ్లేషించబడింది.18S మరియు 28S రైబోసోమల్ సబ్‌యూనిట్‌లు ఎక్సోసోమల్ RNA మైగ్రేషన్ నమూనాలో చాలా అరుదుగా గమనించబడ్డాయి, ఇది నమ్మదగిన స్వచ్ఛతను సూచిస్తుంది (మూర్తి 1C).చివరగా, ట్రాన్స్‌మిషన్ ఎలక్ట్రాన్ మైక్రోస్కోపీ గమనించిన ఎక్సోసోమ్‌లు సుమారు 60-150 nm పరిమాణంలో ఉన్నాయని మరియు ఎక్సోసోమ్ పదనిర్మాణ శాస్త్రం (Fig. 1D)కి విలక్షణమైన కప్పు లాంటి నిర్మాణాన్ని కలిగి ఉన్నాయని చూపించింది.
BV2 కణాల నుండి ఉద్భవించిన ఎక్సోసోమ్‌ల లక్షణం.(A) భద్రతా డేటా షీట్ పేజీ.ప్రోటీన్లు BV2 కణాలు లేదా BV2 నుండి ఉద్భవించిన ఎక్సోసోమ్‌ల నుండి వేరుచేయబడ్డాయి.కణాలు మరియు ఎక్సోసోమ్‌ల మధ్య ప్రోటీన్ నమూనాలు విభిన్నంగా ఉంటాయి.(బి) ఎక్సోసోమల్ మార్కర్ (అలిక్స్) యొక్క వెస్ట్రన్ బ్లాట్ విశ్లేషణ.(C) బయోఅనలైజర్‌ని ఉపయోగించి BV2 కణాలు మరియు BV2 ఉత్పన్నమైన ఎక్సోసోమ్‌ల నుండి శుద్ధి చేయబడిన RNA యొక్క మూల్యాంకనం.అందువలన, BV2 కణాలలో 18S మరియు 28S రైబోసోమల్ సబ్‌యూనిట్‌లు ఎక్సోసోమల్ RNAలో చాలా అరుదుగా కనుగొనబడ్డాయి.(D) ట్రాన్స్మిషన్ ఎలక్ట్రాన్ మైక్రోస్కోపీ BV2 కణాల నుండి వేరుచేయబడిన ఎక్సోసోమ్‌లు 2% యురేనిల్ అసిటేట్‌తో ప్రతికూలంగా తడిసినట్లు చూపించింది.ఎక్సోసోమ్‌లు సుమారు 60-150 nm పరిమాణం మరియు కప్పు ఆకారంలో ఉంటాయి (సాంగ్ మరియు జంగ్, ప్రచురించని డేటా).
కాన్ఫోకల్ మైక్రోస్కోపీని ఉపయోగించి U87 హ్యూమన్ గ్లియోమా కణాలలోకి BV2-ఉత్పన్న ఎక్సోసోమ్‌ల సెల్యులార్ అంతర్గతీకరణ గమనించబడింది.PKH26 లేబుల్ చేయబడిన ఎక్సోసోమ్‌లు U87 కణాల సైటోప్లాజంలో స్థానీకరించబడ్డాయి.న్యూక్లియైలు DAPI (Fig. 2A)తో తడిసినవి, ఇది BV2-ఉత్పన్నమైన ఎక్సోసోమ్‌లను హోస్ట్ కణాల ద్వారా అంతర్గతీకరించవచ్చని మరియు గ్రహీత కణాల వాతావరణాన్ని ప్రభావితం చేస్తుందని సూచిస్తుంది.
BV2-ఉత్పన్నమైన ఎక్సోసోమ్‌లను U87 గ్లియోమా కణాలుగా మరియు BV2-ఉత్పన్నమైన ఎక్సోసోమ్‌ల యొక్క అంతర్గతీకరణ U87 గ్లియోమా కణాల విస్తరణను ప్రేరేపించింది.(ఎ) కాన్ఫోకల్ మైక్రోస్కోపీ ద్వారా కొలవబడిన U87 కణాలచే చుట్టబడిన ఎక్సోసోమ్‌లు.U87 గ్లియోమా కణాలు PKH26 (ఎరుపు)తో లేబుల్ చేయబడిన ఎక్సోసోమ్‌లతో లేదా 24 గంటల పాటు నియంత్రణ లేకుండా పొదిగేవి.న్యూక్లియైలు DAPI (నీలం)తో తడిసినవి మరియు తరువాత కన్ఫోకల్ మైక్రోస్కోప్ (స్కేల్ బార్: 10 μm, x 3000) క్రింద పరిశీలించబడ్డాయి.(బి) U87 గ్లియోమా సెల్ విస్తరణ సెల్ ప్రొలిఫరేషన్ అస్సే ద్వారా నిర్ణయించబడింది.U87 గ్లియోమా కణాలు సూచించిన సమయానికి ఎక్సోసోమ్‌లతో చికిత్స చేయబడ్డాయి. *P <0.05 విద్యార్థుల t పరీక్ష ద్వారా పొందబడింది. *P <0.05 విద్యార్థుల t పరీక్ష ద్వారా పొందబడింది. *P <0,05 по t-критерию Стьюдента. విద్యార్థుల టి-టెస్ట్ ద్వారా *P <0.05. *P <0.05 通过学生t 检验获得。 *P <0.05 * P <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0.05 విద్యార్థుల t-పరీక్షను ఉపయోగించి పొందబడింది.
U87 గ్లియోమా కణాలలోకి BV2-ఉత్పన్న ఎక్సోసోమ్‌ల అంతర్గతీకరణను నిర్ధారించిన తర్వాత, మానవ గ్లియోమా కణాల అభివృద్ధిలో BV2-ఉత్పన్నమైన టోక్సోప్లాస్మా-ఉత్పన్న ఎక్సోసోమ్‌ల పాత్రను పరిశోధించడానికి మేము కణాల విస్తరణ పరీక్షలను చేసాము.T. gondii-సోకిన BV2 కణాల నుండి ఎక్సోసోమ్‌లతో U87 కణాల చికిత్స T. గాండి-సోకిన BV2-ఉత్పన్న ఎక్సోసోమ్‌లు నియంత్రణతో పోలిస్తే U87 కణాల యొక్క అధిక విస్తరణకు కారణమని చూపించాయి (Fig. 2B).
అదనంగా, U118 కణాల పెరుగుదల U87 వలె అదే ఫలితాలను కలిగి ఉంది, ఎందుకంటే టాక్సోప్లాస్మా ఉత్తేజిత ఎక్సోసోమ్‌లు అత్యధిక స్థాయి విస్తరణకు కారణమయ్యాయి (డేటా చూపబడలేదు).ఈ డేటా ఆధారంగా, గ్లియోమా కణాల విస్తరణలో BV2-ఉత్పన్నమైన టాక్సోప్లాస్మా-సోకిన ఎక్సోసోమ్‌లు ముఖ్యమైన పాత్ర పోషిస్తాయని మేము సూచించగలము.
కణితి అభివృద్ధిపై టాక్సోప్లాస్మా-సోకిన BV2-ఉత్పన్న ఎక్సోసోమ్‌ల ప్రభావాన్ని పరిశోధించడానికి, మేము జెనోగ్రాఫ్ట్ మోడల్ కోసం U87 గ్లియోమా కణాలను న్యూడ్ ఎలుకలలోకి ఇంజెక్ట్ చేసాము మరియు BV2-ఉత్పన్నమైన ఎక్సోసోమ్‌లు లేదా RH-ఇన్ఫెక్టెడ్ BV2-ఉత్పన్న ఎక్సోసోమ్‌లను ఇంజెక్ట్ చేసాము.1 వారం తర్వాత కణితులు స్పష్టంగా కనిపించిన తర్వాత, 5 ఎలుకల ప్రతి ప్రయోగాత్మక సమూహం అదే ప్రారంభ బిందువును నిర్ణయించడానికి కణితి పరిమాణం ప్రకారం విభజించబడింది మరియు కణితి పరిమాణాన్ని 22 రోజులు కొలుస్తారు.
U87 జెనోగ్రాఫ్ట్ మోడల్‌తో ఉన్న ఎలుకలలో, BV2-ఉత్పన్నమైన RH- సోకిన ఎక్సోసోమ్ సమూహంలో 22వ రోజు (Fig. 3A,B) గణనీయంగా పెద్ద కణితి పరిమాణం మరియు బరువు గమనించబడ్డాయి.మరోవైపు, ఎక్సోసోమ్ చికిత్స తర్వాత BV2-ఉత్పన్నమైన ఎక్సోసోమ్ సమూహం మరియు నియంత్రణ సమూహం మధ్య కణితి పరిమాణంలో గణనీయమైన తేడా లేదు.అదనంగా, గ్లియోమా కణాలు మరియు ఎక్సోసోమ్‌లతో ఇంజెక్ట్ చేయబడిన ఎలుకలు RH- సోకిన BV2-ఉత్పన్న ఎక్సోసోమ్‌ల సమూహంలో అతిపెద్ద కణితి వాల్యూమ్‌ను దృశ్యమానంగా ప్రదర్శించాయి (Fig. 3C).ఈ ఫలితాలు BV2-ఉత్పన్నమైన టాక్సోప్లాస్మా-సోకిన ఎక్సోసోమ్‌లు మౌస్ ట్యూమర్ మోడల్‌లో గ్లియోమా పెరుగుదలను ప్రేరేపిస్తాయని నిరూపిస్తున్నాయి.
U87 జెనోగ్రాఫ్ట్ మౌస్ మోడల్‌లో BV2-ఉత్పన్నమైన ఎక్సోసోమ్‌ల ఆంకోజెనిసిస్ (AC).BV2 నుండి తీసుకోబడిన RH- సోకిన ఎక్సోసోమ్‌లతో చికిత్స చేయబడిన BALB/c న్యూడ్ ఎలుకలలో కణితి పరిమాణం (A) మరియు బరువు (B) గణనీయంగా పెరిగింది.BALB/c న్యూడ్ ఎలుకలు (C) మ్యాట్రిజెల్ మిశ్రమంలో సస్పెండ్ చేయబడిన 1 x 107 U87 కణాలతో సబ్‌కటానియస్‌గా ఇంజెక్ట్ చేయబడ్డాయి.ఇంజెక్షన్ చేసిన ఆరు రోజుల తరువాత, 100 μg BV2- ఉత్పన్నమైన ఎక్సోసోమ్‌లు ఎలుకలలో చికిత్స చేయబడ్డాయి.కణితి పరిమాణం మరియు బరువు వరుసగా సూచించిన రోజులలో మరియు త్యాగం తర్వాత కొలుస్తారు. *P <0.05. *P <0.05. *R <0,05. *P <0.05. *P <0.05. *P <0.05. *R <0,05. *P <0.05.
టాక్సోప్లాస్మా RH స్ట్రెయిన్ (Fig. 4A)తో సంక్రమణ తర్వాత మైక్రోగ్లియాలో రోగనిరోధక శక్తి లేదా కణితి అభివృద్ధికి సంబంధించిన 37 miRNA లు (16 అతిగా ఒత్తిడి మరియు 21 తగ్గించబడినవి) గణనీయంగా మార్చబడినట్లు డేటా చూపించింది.మార్చబడిన miRNA లలో miR-21 యొక్క సాపేక్ష వ్యక్తీకరణ స్థాయిలు BV2 నుండి తీసుకోబడిన ఎక్సోసోమ్‌లలో నిజ-సమయ RT-PCR ద్వారా నిర్ధారించబడ్డాయి, BV2 మరియు U87 కణాలతో చికిత్స చేయబడిన ఎక్సోసోమ్‌లు.miR-21 యొక్క వ్యక్తీకరణ టోక్సోప్లాస్మా గోండి (RH స్ట్రెయిన్) (Fig. 4B) సోకిన BV2 కణాల నుండి ఎక్సోసోమ్‌లలో గణనీయమైన పెరుగుదలను చూపించింది.మార్చబడిన ఎక్సోసోమ్‌లను తీసుకున్న తర్వాత BV2 మరియు U87 కణాలలో miR-21 యొక్క సాపేక్ష వ్యక్తీకరణ స్థాయిలు పెరిగాయి (Fig. 4B).కణితి రోగుల మెదడు కణజాలంలో miR-21 వ్యక్తీకరణ యొక్క సాపేక్ష స్థాయిలు మరియు టాక్సోప్లాస్మా గోండి (ME49 స్ట్రెయిన్) సోకిన ఎలుకలు వరుసగా నియంత్రణల కంటే ఎక్కువగా ఉన్నాయి (Fig. 4C).ఈ ఫలితాలు విట్రో మరియు వివోలో అంచనా వేయబడిన మరియు ధృవీకరించబడిన మైక్రోఆర్ఎన్ఏల వ్యక్తీకరణ స్థాయిల మధ్య వ్యత్యాసాలతో పరస్పర సంబంధం కలిగి ఉంటాయి.
టాక్సోప్లాస్మా గోండి (RH) సోకిన మైక్రోగ్లియాలో ఎక్సోసోమల్ miP-21a-5p యొక్క వ్యక్తీకరణలో మార్పులు.(A) T. gondii RH ఇన్ఫెక్షన్ తర్వాత రోగనిరోధక శక్తి లేదా కణితి అభివృద్ధికి సంబంధించిన siRNAలో ముఖ్యమైన మార్పులను ప్రదర్శిస్తుంది.(B) BV2-ఉత్పన్న ఎక్సోసోమ్‌లు, BV2-చికిత్స చేయబడిన ఎక్సోసోమ్‌లు మరియు U87 కణాలలో రియల్ టైమ్ RT-PCR ద్వారా సాపేక్ష miR-21 వ్యక్తీకరణ స్థాయిలు కనుగొనబడ్డాయి.(సి) కణితి రోగుల మెదడు కణజాలాలలో (N=3) మరియు టాక్సోప్లాస్మా గోండి (ME49 స్ట్రెయిన్) (N=3) సోకిన ఎలుకలలో సాపేక్ష miR-21 వ్యక్తీకరణ స్థాయిలు కనుగొనబడ్డాయి. *P <0.05 విద్యార్థుల t పరీక్ష ద్వారా పొందబడింది. *P <0.05 విద్యార్థుల t పరీక్ష ద్వారా పొందబడింది. *P <0,05 было получено с помощью t-критерия Стьюдента. *P <0.05 విద్యార్థుల t-పరీక్షను ఉపయోగించి పొందబడింది. *P <0.05 通过学生t 检验获得。 *P <0.05 * P <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0.05 విద్యార్థుల t-పరీక్షను ఉపయోగించి పొందబడింది.
RH- సోకిన BV2 కణాల నుండి ఎక్సోసోమ్‌లు వివో మరియు ఇన్ విట్రోలో గ్లియోమాస్ పెరుగుదలకు దారితీశాయి (Fig. 2, 3).సంబంధిత mRNAలను గుర్తించడానికి, BV2 లేదా RH BV2 నుండి ఉద్భవించిన ఎక్సోసోమ్‌లతో సోకిన U87 కణాలలో యాంటిట్యూమర్ టార్గెట్ జన్యువులు, ఫోర్క్‌హెడ్ బాక్స్ O1 (FoxO1), PTEN మరియు ప్రోగ్రామ్ చేయబడిన సెల్ డెత్ 4 (PDCD4) యొక్క mRNA స్థాయిలను మేము పరిశీలించాము.FoxO1, PTEN మరియు PDCD4 జన్యువులతో సహా అనేక కణితి-సంబంధిత జన్యువులు miR-2121,22 బైండింగ్ సైట్‌లను కలిగి ఉన్నాయని బయోఇన్ఫర్మేటిక్స్ విశ్లేషణ చూపించింది.BV2-ఉత్పన్న ఎక్సోసోమ్‌లతో పోలిస్తే RH-సోకిన BV2-ఉత్పన్న ఎక్సోసోమ్‌లలో యాంటిట్యూమర్ టార్గెట్ జన్యువుల mRNA స్థాయిలు తగ్గించబడ్డాయి (Fig. 5A).BV2-ఉత్పన్నమైన ఎక్సోసోమ్‌లతో పోలిస్తే (Figure 5B) FoxO1 RH- సోకిన BV2-ఉత్పన్న ఎక్సోసోమ్‌లలో ప్రోటీన్ స్థాయిలను తగ్గించింది.ఈ ఫలితాల ఆధారంగా, RH- సోకిన BV2 నుండి తీసుకోబడిన ఎక్సోసోమ్‌లు యాంటీ-ఆంకోజెనిక్ జన్యువులను తగ్గించి, కణితి పెరుగుదలలో వాటి పాత్రను నిర్వహిస్తాయని మేము నిర్ధారించగలము.
టోక్సోప్లాస్మా RH- సోకిన BV2-ఉత్పన్న ఎక్సోసోమ్‌లు U87 గ్లియోమా కణాలలో టోక్సోప్లాస్మా RH- సోకిన BV2-ఉత్పన్న ఎక్సోసోమ్‌ల ద్వారా యాంటిట్యూమర్ జన్యువులను అణచివేయడానికి ప్రేరేపిస్తాయి.(A) PBS ఎక్సోసోమ్‌లతో పోలిస్తే T. gondii RH- సోకిన BV2 నుండి ఉద్భవించిన ఎక్సోసోమ్‌లలో FoxO1, PTEN మరియు PDCD4 వ్యక్తీకరణ యొక్క నిజ-సమయ PCR.β-ఆక్టిన్ mRNA నియంత్రణగా ఉపయోగించబడింది.(బి) ఫాక్స్ఓ1 వ్యక్తీకరణ వెస్ట్రన్ బ్లాటింగ్ ద్వారా నిర్ణయించబడింది మరియు ఇమేజ్‌జే ప్రోగ్రామ్‌ని ఉపయోగించి డెన్సిటోమెట్రీ డేటా గణాంకపరంగా మూల్యాంకనం చేయబడింది. *P <0.05 విద్యార్థుల t పరీక్ష ద్వారా పొందబడింది. *P <0.05 విద్యార్థుల t పరీక్ష ద్వారా పొందబడింది. *P <0,05 было получено с помощью t-критерия Стьюдента. *P <0.05 విద్యార్థుల t-పరీక్షను ఉపయోగించి పొందబడింది. *P <0.05 通过学生t 检验获得。 *P <0.05 * P <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0.05 విద్యార్థుల t-పరీక్షను ఉపయోగించి పొందబడింది.
కణితి-అనుబంధ జన్యు నియంత్రణపై ఎక్సోసోమ్‌లలో miP-21 యొక్క ప్రభావాన్ని అర్థం చేసుకోవడానికి, U87 కణాలు లిపోఫెక్టమైన్ 2000ని ఉపయోగించి miP-21 యొక్క నిరోధకంతో బదిలీ చేయబడ్డాయి మరియు కణాలు బదిలీ చేయబడిన 24 గంటల తర్వాత సేకరించబడ్డాయి.miR-21 ఇన్హిబిటర్‌లతో బదిలీ చేయబడిన కణాలలో FoxO1 మరియు p27 వ్యక్తీకరణ స్థాయిలు qRT-PCR (Fig. 6A,B) ఉపయోగించి BV2-ఉత్పన్నమైన ఎక్సోసోమ్‌లతో చికిత్స చేయబడిన కణాలతో పోల్చబడ్డాయి.miR-21 ఇన్హిబిటర్‌ని U87 కణాలలోకి బదిలీ చేయడం వలన FoxO1 మరియు p27 వ్యక్తీకరణ (FIG. 6) గణనీయంగా తగ్గింది.
RH-సోకిన ఎక్సోసోమల్ BV2-ఉత్పన్నమైన miP-21 U87 గ్లియోమా కణాలలో FoxO1/p27 వ్యక్తీకరణను మార్చింది.U87 కణాలు లిపోఫెక్టమైన్ 2000ని ఉపయోగించి miP-21 ఇన్హిబిటర్‌తో బదిలీ చేయబడ్డాయి మరియు బదిలీ అయిన 24 గంటల తర్వాత కణాలు సేకరించబడ్డాయి.miR-21 ఇన్హిబిటర్‌లతో బదిలీ చేయబడిన కణాలలో FoxO1 మరియు p27 వ్యక్తీకరణ స్థాయిలు qRT-PCR (A, B)ని ఉపయోగించి BV2-ఉత్పన్న ఎక్సోసోమ్‌లతో చికిత్స చేయబడిన కణాల స్థాయిలతో పోల్చబడ్డాయి.
హోస్ట్ యొక్క రోగనిరోధక ప్రతిస్పందన నుండి తప్పించుకోవడానికి, టాక్సోప్లాస్మా పరాన్నజీవి కణజాల తిత్తిగా రూపాంతరం చెందుతుంది.అవి హోస్ట్ యొక్క జీవితకాలంలో మెదడు, గుండె మరియు అస్థిపంజర కండరాలతో సహా వివిధ కణజాలాలను పరాన్నజీవి చేస్తాయి మరియు హోస్ట్ యొక్క రోగనిరోధక ప్రతిస్పందనను మాడ్యులేట్ చేస్తాయి.అదనంగా, వారు కణ చక్రం మరియు హోస్ట్ కణాల అపోప్టోసిస్‌ను నియంత్రించవచ్చు, వాటి విస్తరణను ప్రోత్సహిస్తుంది14,24.టోక్సోప్లాస్మా గోండి ప్రధానంగా హోస్ట్ డెన్డ్రిటిక్ కణాలు, న్యూట్రోఫిల్స్ మరియు మెదడు మైక్రోగ్లియాతో సహా మోనోసైట్/మాక్రోఫేజ్ వంశాన్ని సోకుతుంది.టోక్సోప్లాస్మా గోండి M2 ఫినోటైప్ యొక్క మాక్రోఫేజ్‌ల భేదాన్ని ప్రేరేపిస్తుంది, వ్యాధికారక సంక్రమణ తర్వాత గాయం మానడాన్ని ప్రభావితం చేస్తుంది మరియు హైపర్‌వాస్కులరైజేషన్ మరియు గ్రాన్యులోమాటస్ ఫైబ్రోసిస్‌తో కూడా సంబంధం కలిగి ఉంటుంది.టాక్సోప్లాస్మా ఇన్ఫెక్షన్ యొక్క ఈ ప్రవర్తనా రోగనిర్ధారణ కణితి అభివృద్ధికి సంబంధించిన గుర్తులకు సంబంధించినది కావచ్చు.టాక్సోప్లాస్మాచే నియంత్రించబడే ప్రతికూల వాతావరణం సంబంధిత పూర్వ క్యాన్సర్‌ను పోలి ఉండవచ్చు.అందువల్ల, టోక్సోప్లాస్మా ఇన్ఫెక్షన్ మెదడు కణితుల అభివృద్ధికి దోహదం చేస్తుందని భావించవచ్చు.వాస్తవానికి, వివిధ మెదడు కణితులతో బాధపడుతున్న రోగుల సీరంలో టాక్సోప్లాస్మా ఇన్ఫెక్షన్ యొక్క అధిక రేట్లు నివేదించబడ్డాయి.అదనంగా, టోక్సోప్లాస్మా గోండి మరొక క్యాన్సర్ కారకం కావచ్చు మరియు ఇతర ఇన్ఫెక్షియస్ కార్సినోజెన్‌లు మెదడు కణితులను అభివృద్ధి చేయడంలో సహాయపడటానికి సినర్జిస్టిక్‌గా పనిచేస్తాయి.ఈ విషయంలో, P. ఫాల్సిపరమ్ మరియు ఎప్స్టీన్-బార్ వైరస్ బుర్కిట్ యొక్క లింఫోమా ఏర్పడటానికి సినర్జిస్టిక్‌గా దోహదపడతాయని గమనించాలి.
క్యాన్సర్ పరిశోధన రంగంలో నియంత్రకాలుగా ఎక్సోసోమ్‌ల పాత్ర విస్తృతంగా పరిశోధించబడింది.అయినప్పటికీ, పరాన్నజీవులు మరియు సోకిన అతిధేయల మధ్య ఎక్సోసోమ్‌ల పాత్ర సరిగా అర్థం కాలేదు.ఇప్పటివరకు, స్రవించే ప్రోటీన్‌లతో సహా వివిధ నియంత్రకాలు, ప్రోటోజోవాన్ పరాన్నజీవులు హోస్ట్ దాడిని నిరోధించే మరియు ఇన్‌ఫెక్షన్‌ను శాశ్వతం చేసే జీవ ప్రక్రియలను వివరించారు.ఇటీవల, ప్రోటోజోవాన్-అనుబంధ మైక్రోవేసికల్స్ మరియు వాటి మైక్రోఆర్ఎన్ఏలు వాటి మనుగడకు అనుకూలమైన వాతావరణాన్ని సృష్టించడానికి హోస్ట్ కణాలతో సంకర్షణ చెందుతాయి అనే భావన పెరుగుతోంది.అందువల్ల, మార్చబడిన ఎక్సోసోమల్ మిఆర్‌ఎన్‌ఎలు మరియు గ్లియోమా సెల్ విస్తరణ మధ్య సంబంధాన్ని కనుగొనడానికి మరిన్ని అధ్యయనాలు అవసరం.మైక్రోఆర్ఎన్ఎ మార్పు (క్లస్టర్ జన్యువులు miR-30c-1, miR-125b-2, miR-23b-27b-24-1 మరియు miR-17-92) టాక్సోప్లాస్మా-సోకిన మానవ మాక్రోఫేజ్‌లలోని STAT3 ప్రమోటర్‌తో బంధిస్తుంది, ఇది నియంత్రించబడుతుంది మరియు ప్రేరేపిస్తుంది -టాక్సోప్లాస్మా గోండి ఇన్ఫెక్షన్ 29కి ప్రతిస్పందనగా అపోప్టోసిస్.టాక్సోప్లాస్మా ఇన్ఫెక్షన్ miR-17-5p మరియు miR-106b-5p యొక్క వ్యక్తీకరణను పెంచుతుంది, ఇవి అనేక హైపర్‌ప్రొలిఫెరేటివ్ వ్యాధులతో సంబంధం కలిగి ఉంటాయి 30 .ఈ డేటా టాక్సోప్లాస్మా ఇన్ఫెక్షన్ ద్వారా నియంత్రించబడే హోస్ట్ మైఆర్‌ఎన్‌ఏలు పరాన్నజీవి మనుగడకు మరియు హోస్ట్ జీవ ప్రవర్తనలో వ్యాధికారకానికి ముఖ్యమైన అణువులు అని సూచిస్తున్నాయి.
మార్చబడిన miRNA లు గ్లియోమాస్‌తో సహా ప్రాణాంతక కణాల ప్రారంభ మరియు పురోగతి సమయంలో వివిధ రకాల ప్రవర్తనలను ప్రభావితం చేయగలవు: వృద్ధి సంకేతాల స్వయం సమృద్ధి, పెరుగుదల-నిరోధక సంకేతాల పట్ల సున్నితత్వం, అపోప్టోసిస్ ఎగవేత, అపరిమిత ప్రతిరూప సంభావ్యత, యాంజియోజెనిసిస్, దండయాత్ర మరియు మెటాస్టాసిస్ మరియు వాపు.గ్లియోమాలో, అనేక వ్యక్తీకరణ ప్రొఫైలింగ్ అధ్యయనాలలో మార్చబడిన miRNA లు గుర్తించబడ్డాయి.
ప్రస్తుత అధ్యయనంలో, టాక్సోప్లాస్మా-సోకిన హోస్ట్ కణాలలో అధిక స్థాయి miRNA-21 వ్యక్తీకరణను మేము ధృవీకరించాము.miR-21 గ్లియోమాస్, 33తో సహా ఘన కణితుల్లో అత్యంత తరచుగా అతిగా ఒత్తిడి చేయబడిన మైక్రోఆర్ఎన్ఏలలో ఒకటిగా గుర్తించబడింది మరియు దాని వ్యక్తీకరణ గ్లియోమా గ్రేడ్‌తో సహసంబంధం కలిగి ఉంటుంది.miR-21 అనేది గ్లియోమా పెరుగుదలలో యాంటీ-అపోప్టోటిక్ కారకంగా పని చేసే ఒక నవల ఆంకోజీన్ అని మరియు మానవ మెదడు ప్రాణాంతకత యొక్క కణజాలాలు మరియు ప్లాస్మాలో అధికంగా ఒత్తిడి చేయబడుతుందని ఆధారాలను సేకరించడం సూచిస్తుంది.ఆసక్తికరంగా, గ్లియోమా కణాలు మరియు కణజాలాలలో miR-21 నిష్క్రియం కాస్పేస్-ఆధారిత అపోప్టోసిస్ కారణంగా కణాల విస్తరణ నిరోధాన్ని ప్రేరేపిస్తుంది.miR-21 అంచనా వేసిన లక్ష్యాల యొక్క బయోఇన్ఫర్మేటిక్ విశ్లేషణ miR-2121 బైండింగ్ సైట్‌తో ప్రోగ్రామ్ చేయబడిన సెల్ డెత్ 4 (PDCD4), ట్రోపోమియోసిన్ (TPM1), PTEN మరియు ఫోర్క్‌హెడ్ బాక్స్ O1 (FoxO1)తో సహా అపోప్టోసిస్ మార్గాలతో అనుబంధించబడిన బహుళ ట్యూమర్ సప్రెసర్ జన్యువులను వెల్లడించింది..22.38
FoxO1, ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్ కారకాలలో ఒకటిగా (FoxO), వివిధ రకాల మానవ క్యాన్సర్‌ల అభివృద్ధిలో పాల్గొంటుంది మరియు p21, p27, Bim మరియు FasL40 వంటి ట్యూమర్ సప్రెజర్ జన్యువుల వ్యక్తీకరణను నియంత్రించగలదు.FoxO1 కణాల పెరుగుదలను అణిచివేసేందుకు p27 వంటి సెల్ సైకిల్ ఇన్హిబిటర్‌లను బంధిస్తుంది మరియు సక్రియం చేస్తుంది.అంతేకాకుండా, FoxO1 అనేది PI3K/Akt సిగ్నలింగ్ యొక్క కీలక ప్రభావం మరియు p2742 ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్ యొక్క క్రియాశీలత ద్వారా సెల్ సైకిల్ ప్రోగ్రెషన్ మరియు సెల్ డిఫరెన్సియేషన్ వంటి అనేక జీవ ప్రక్రియలను నియంత్రిస్తుంది.
ముగింపులో, టాక్సోప్లాస్మా-సోకిన మైక్రోగ్లియా నుండి తీసుకోబడిన ఎక్సోసోమల్ మిఆర్-21 గ్లియోమా కణాల పెరుగుదల నియంత్రకంగా ముఖ్యమైన పాత్ర పోషిస్తుందని మేము నమ్ముతున్నాము (Fig. 7).అయినప్పటికీ, ఎక్సోసోమల్ మిఆర్ -21, మార్చబడిన టాక్సోప్లాస్మా ఇన్ఫెక్షన్ మరియు గ్లియోమా పెరుగుదల మధ్య ప్రత్యక్ష సంబంధాన్ని కనుగొనడానికి మరిన్ని అధ్యయనాలు అవసరం.ఈ ఫలితాలు టోక్సోప్లాస్మా ఇన్ఫెక్షన్ మరియు గ్లియోమా సంభవం మధ్య సంబంధాన్ని అధ్యయనం చేయడానికి ప్రారంభ బిందువును అందిస్తాయి.
గ్లియోమా (మెదడు) కార్సినోజెనిసిస్ యొక్క మెకానిజం యొక్క స్కీమాటిక్ రేఖాచిత్రం ఈ అధ్యయనంలో ప్రతిపాదించబడింది.రచయిత PowerPoint 2019 (Microsoft, Redmond, WA)లో గీశారు.
జంతువుల వాడకంతో సహా ఈ అధ్యయనంలోని అన్ని ప్రయోగాత్మక ప్రోటోకాల్‌లు సియోల్ నేషనల్ యూనివర్శిటీ యానిమల్ కేర్ మరియు యూజర్ కమిటీ స్టాండర్డ్ ఎథికల్ గైడ్‌లైన్స్‌కు అనుగుణంగా ఉన్నాయి మరియు సియోల్ నేషనల్ యూనివర్శిటీ స్కూల్ ఆఫ్ మెడిసిన్ (IRB నంబర్ SNU-) యొక్క సంస్థాగత సమీక్ష బోర్డుచే ఆమోదించబడ్డాయి. 150715).-2).అన్ని ప్రయోగాత్మక విధానాలు ARRIVE సిఫార్సులకు అనుగుణంగా జరిగాయి.
BV2 మౌస్ మైక్రోగ్లియా మరియు U87 హ్యూమన్ గ్లియోమా కణాలు డుల్బెకోస్ మోడిఫైడ్ ఈగిల్స్ మీడియం (DMEM; వెల్జీన్, సియోల్, కొరియా) మరియు రోస్‌వెల్ పార్క్ మెమోరియల్ ఇన్స్టిట్యూట్ యొక్క మీడియం (RPMI; వెల్జీన్)లో వరుసగా కల్చర్ చేయబడ్డాయి, ఒక్కొక్కటి 10% పిండం బోవిన్ సీరం, 4 మి.మీ. గ్లుటామైన్, 0.2 mM పెన్సిలిన్ మరియు 0.05 mM స్ట్రెప్టోమైసిన్.37°C వద్ద 5% CO2 ఉన్న ఇంక్యుబేటర్‌లో కణాలు కల్చర్ చేయబడ్డాయి.మరొక గ్లియోమా సెల్ లైన్, U118, U87 కణాలతో పోల్చడానికి ఉపయోగించబడింది.
T. గోండి-సోకిన RH మరియు ME49 జాతుల నుండి ఎక్సోసోమ్‌లను వేరుచేయడానికి, T. గోండి టాచైజోయిట్స్ (RH స్ట్రెయిన్) 3-4 రోజుల ముందు ఇంజెక్ట్ చేయబడిన 6 వారాల వయస్సు గల BALB/c ఎలుకల ఉదర కుహరం నుండి సేకరించబడ్డాయి.Tachyzoites PBSతో మూడుసార్లు కడిగి, 40% పెర్కాల్ (సిగ్మా-ఆల్డ్రిచ్, సెయింట్ లూయిస్, MO, USA)43లో సెంట్రిఫ్యూగేషన్ ద్వారా శుద్ధి చేయబడ్డాయి.స్ట్రెయిన్ ME49 యొక్క టాచైజోయిట్‌లను పొందేందుకు, BALB/c ఎలుకలకు 20 టిష్యూ సిస్ట్‌లతో ఇంట్రాపెరిటోనియల్‌గా ఇంజెక్ట్ చేశారు మరియు ఇన్‌ఫెక్షన్ (PI) తర్వాత 6-8వ రోజు ఉదర కుహరాన్ని కడగడం ద్వారా తిత్తులలో టాచైజోయిట్ పరివర్తనను సేకరించారు.ఎలుకలకు PBS సోకింది.ME49 టాచీజోయిట్‌లు 100 μg/ml పెన్సిలిన్ (గిబ్కో/BRL, గ్రాండ్ ఐలాండ్, NY, USA), 100 μg/ml స్ట్రెప్టోమైసిన్ (గిబ్కో/BRL) మరియు 5% పిండం బోవిన్ సీరం (లోన్జా, ఎమ్‌డి)తో అనుబంధంగా ఉన్న కణాలలో పెరిగాయి. .., USA) 37 °C మరియు 5% కార్బన్ డయాక్సైడ్ వద్ద.వెరో కణాలలో సాగు చేసిన తర్వాత, ME49 టాచైజోయిట్‌లను 25 గేజ్ సూది ద్వారా రెండుసార్లు పంపారు మరియు శిధిలాలు మరియు కణాలను తొలగించడానికి 5 µm ఫిల్టర్ ద్వారా పంపించారు.కడిగిన తర్వాత, టాచైజోయిట్‌లు PBS44లో తిరిగి అమర్చబడ్డాయి.టాక్సోప్లాస్మా గోండి స్ట్రెయిన్ ME49 యొక్క కణజాల తిత్తులు సోకిన C57BL/6 ఎలుకల మెదడు నుండి వేరుచేయబడిన తిత్తుల ఇంట్రాపెరిటోనియల్ ఇంజెక్షన్ ద్వారా నిర్వహించబడతాయి (ఓరియంట్ బయో యానిమల్ సెంటర్, సియోంగ్నామ్, కొరియా).ME49- సోకిన ఎలుకల మెదళ్ళు 3 నెలల PI తర్వాత పండించబడ్డాయి మరియు తిత్తులను వేరుచేయడానికి సూక్ష్మదర్శిని క్రింద ముక్కలు చేయబడ్డాయి.సోకిన ఎలుకలను సియోల్ నేషనల్ యూనివర్శిటీ స్కూల్ ఆఫ్ మెడిసిన్‌లో ప్రత్యేక వ్యాధికారక రహిత పరిస్థితులలో (SPF) ఉంచారు.
తయారీదారు సూచనల మేరకు miRNeasy Mini Kit (Qiagen, Hilden, Germany)ని ఉపయోగించి BV2-ఉత్పన్న ఎక్సోసోమ్‌లు, BV2 కణాలు మరియు కణజాలాల నుండి మొత్తం RNA సంగ్రహించబడింది, ఎలుషన్ స్టెప్ కోసం పొదిగే సమయంతో సహా.నానోడ్రాప్ 2000 స్పెక్ట్రోఫోటోమీటర్‌లో RNA ఏకాగ్రత నిర్ణయించబడింది.ఎజిలెంట్ 2100 బయోఅనలైజర్ (ఎజిలెంట్ టెక్నాలజీస్, ఆమ్‌స్టెల్‌వీన్, నెదర్లాండ్స్) ఉపయోగించి RNA మైక్రోఅరేల నాణ్యత అంచనా వేయబడింది.
10% ఎక్సోసోమ్-పేలవమైన FBSతో DMEM 100,000g వద్ద 16 గంటలపాటు 4°C వద్ద అల్ట్రాసెంట్రిఫ్యూగేషన్ ద్వారా తయారు చేయబడింది మరియు 0.22 µm ఫిల్టర్ (నల్జీన్, రోచెస్టర్, NY, USA) ద్వారా ఫిల్టర్ చేయబడింది.BV2 కణాలు, 5 × 105, 37°C మరియు 5% CO2 వద్ద 10% ఎక్సోసోమ్-క్షీణించిన FBS మరియు 1% యాంటీబయాటిక్‌లను కలిగి ఉన్న DMEMలో కల్చర్ చేయబడ్డాయి.24 గంటల పొదిగే తర్వాత, స్ట్రెయిన్ RH లేదా ME49 (MOI = 10) యొక్క టాచీజోయిట్‌లు కణాలకు జోడించబడ్డాయి మరియు దాడి చేయని పరాన్నజీవులు ఒక గంటలోపు తొలగించబడ్డాయి మరియు DMEM తో రీఫిల్ చేయబడ్డాయి.BV2 కణాల నుండి ఎక్సోసోమ్‌లు సవరించబడిన అవకలన సెంట్రిఫ్యూగేషన్ ద్వారా వేరుచేయబడ్డాయి, ఇది అత్యంత విస్తృతంగా ఉపయోగించే పద్ధతి.RNA లేదా ప్రోటీన్ విశ్లేషణ కోసం 300 µl PBSలో ఎక్సోసోమ్ గుళికను మళ్లీ సస్పెండ్ చేయండి.వివిక్త ఎక్సోసోమ్‌ల ఏకాగ్రత BCA ప్రోటీన్ అస్సే కిట్ (పియర్స్, రాక్‌ఫోర్డ్, IL, USA) మరియు నానోడ్రాప్ 2000 స్పెక్ట్రోఫోటోమీటర్‌ను ఉపయోగించి నిర్ణయించబడింది.
BV2 కణాల నుండి అవక్షేపాలు లేదా BV2 నుండి ఉద్భవించిన ఎక్సోసోమ్‌లు PRO-PREP™ ప్రోటీన్ వెలికితీత ద్రావణంలో (iNtRon బయోటెక్నాలజీ, సియోంగ్నామ్, కొరియా) లైస్ చేయబడ్డాయి మరియు ప్రోటీన్‌లు కూమాస్సీ బ్రిలియంట్ బ్లూ స్టెయిన్డ్ 10% SDS పాలియాక్రిలమైడ్ జెల్స్‌పై లోడ్ చేయబడ్డాయి.అదనంగా, ప్రోటీన్లు 2 గంటలు PVDF పొరలకు బదిలీ చేయబడ్డాయి.వెస్ట్రన్ బ్లాట్‌లు అలిక్స్ యాంటీబాడీ (సెల్ సిగ్నలింగ్ టెక్నాలజీ, బెవర్లీ, MA, USA)ని ఎక్సోసోమల్ మార్కర్‌గా ఉపయోగించి ధృవీకరించబడ్డాయి.HRP-కంజుగేటెడ్ మేక యాంటీ-మౌస్ IgG (H + L) (బెథైల్ లాబొరేటరీస్, మోంట్‌గోమేరీ, TX, USA) మరియు LAS-1000 ప్లస్ లుమినిసెంట్ ఇమేజ్ ఎనలైజర్ (ఫుజి ఫోటోగ్రాఫిక్ ఫిల్మ్, టోక్యో, జపాన్) సెకండరీ యాంటీబాడీగా ఉపయోగించబడ్డాయి..ఎక్సోసోమ్‌ల పరిమాణం మరియు స్వరూపాన్ని అధ్యయనం చేయడానికి ట్రాన్స్‌మిషన్ ఎలక్ట్రాన్ మైక్రోస్కోపీని ప్రదర్శించారు.BV2 కణాల నుండి (6.40 µg/µl) వేరుచేయబడిన ఎక్సోసోమ్‌లు కార్బన్-పూతతో కూడిన మెష్‌లపై తయారు చేయబడ్డాయి మరియు 1 నిమిషం పాటు 2% యురేనిల్ అసిటేట్‌తో ప్రతికూలంగా తడిసినవి.ES1000W ఎర్లాంగ్‌షెన్ CCD కెమెరా (గటాన్, ప్లెసాంటన్, CA, USA)తో కూడిన JEOL 1200-EX II (టోక్యో, జపాన్)ని ఉపయోగించి 80 kV వేగవంతమైన వోల్టేజ్ వద్ద సిద్ధం చేయబడిన నమూనాలు గమనించబడ్డాయి.
BV2-ఉత్పన్నమైన ఎక్సోసోమ్‌లు PKH26 రెడ్ ఫ్లోరోసెంట్ లింకర్ కిట్ (సిగ్మా-ఆల్డ్రిచ్, సెయింట్. లూయిస్, MO, USA)ని ఉపయోగించి గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద 15 నిమిషాల పాటు స్టెయిన్ చేయబడ్డాయి.U87 కణాలు, 2×105, PKH26-లేబుల్ చేయబడిన ఎక్సోసోమ్‌లు (ఎరుపు) లేదా ప్రతికూల నియంత్రణగా ఎటువంటి ఎక్సోసోమ్‌లు లేవు, 5% CO2 ఇంక్యుబేటర్‌లో 24 గంటలపాటు 37°C వద్ద పొదిగేవి.U87 సెల్ న్యూక్లియైలు DAPI (నీలం)తో తడిసినవి, U87 కణాలు 4% పారాఫార్మల్డిహైడ్‌లో 15 నిమిషాలు 4 ° C వద్ద స్థిరపరచబడ్డాయి మరియు తరువాత లైకా TCS SP8 STED CW కన్ఫోకల్ మైక్రోస్కోప్ సిస్టమ్‌లో విశ్లేషించబడ్డాయి (లైకా మైక్రోసిస్టమ్స్, మ్యాన్‌హీమ్, జర్మనీ).గమనించదగినది.
mir-X siRNA ఫస్ట్ స్ట్రాండ్ సింథసిస్ మరియు SYBR qRT-PCR కిట్ (తకారా బయో ఇంక్., షిగా, జపాన్) ఉపయోగించి siRNA నుండి cDNA సంశ్లేషణ చేయబడింది.SYBR ప్రీమిక్స్‌తో కలిపిన ప్రైమర్‌లు మరియు టెంప్లేట్‌లను ఉపయోగించి iQ5 రియల్ టైమ్ PCR డిటెక్షన్ సిస్టమ్ (బయో-రాడ్, హెర్క్యులస్, CA, USA) ఉపయోగించి రియల్ టైమ్ క్వాంటిటేటివ్ PCR ప్రదర్శించబడింది.DNA 15 సెకన్లకు 95 ° C వద్ద డీనాటరేషన్ యొక్క 40 చక్రాల కోసం విస్తరించబడింది మరియు 60 సెకన్లకు 60 ° C వద్ద ఎనియలింగ్ చేయబడింది.ప్రతి PCR ప్రతిచర్య నుండి డేటా iQ™5 ఆప్టికల్ సిస్టమ్ సాఫ్ట్‌వేర్ (బయో-రాడ్) యొక్క డేటా విశ్లేషణ మాడ్యూల్‌ను ఉపయోగించి విశ్లేషించబడింది.ఎంచుకున్న లక్ష్య జన్యువులు మరియు β-actin/siRNA (మరియు U6) మధ్య జన్యు వ్యక్తీకరణలో సాపేక్ష మార్పులు ప్రామాణిక వక్రత పద్ధతిని ఉపయోగించి లెక్కించబడ్డాయి.ఉపయోగించిన ప్రైమర్ సీక్వెన్సులు టేబుల్ 1లో చూపబడ్డాయి.
3 x 104 U87 గ్లియోమా కణాలు 96-బావి పలకలలో సీడ్ చేయబడ్డాయి మరియు BV2 (50 μg/mL) నుండి తీసుకోబడిన టాక్సోప్లాస్మా-ఇన్ఫెక్టెడ్ ఎక్సోసోమ్‌లతో లేదా BV2 (50 μg/mL) నుండి తీసుకోబడిన నాన్‌పల్స్ ఎక్సోసోమ్‌లతో 12, ​​18 మరియు 136 గంటలకు నియంత్రణలుగా ఉంటాయి. .సెల్ కౌంటింగ్ కిట్-8 (డోజిండో, కుమామోటో, జపాన్) (సప్లిమెంటరీ ఫిగర్స్ S1-S3) 46 ఉపయోగించి సెల్ విస్తరణ రేటు నిర్ణయించబడింది.
5 వారాల వయస్సు గల ఆడ BALB/c నగ్న ఎలుకలను ఓరియంట్ బయో (సియోంగ్నామ్-సి, దక్షిణ కొరియా) నుండి కొనుగోలు చేసి, గది ఉష్ణోగ్రత (22±2°C) మరియు తేమ (45±15°C) వద్ద శుభ్రమైన బోనులలో ఒక్కొక్కటిగా ఉంచబడ్డాయి.%) గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద (22±2°C) మరియు తేమ (45±15%).SPF (సియోల్ నేషనల్ యూనివర్శిటీ స్కూల్ ఆఫ్ మెడిసిన్ యానిమల్ సెంటర్) కింద 12 గంటల కాంతి చక్రం మరియు 12 గంటల చీకటి చక్రం ప్రదర్శించబడింది.ఎలుకలను యాదృచ్ఛికంగా 5 ఎలుకల మూడు సమూహాలుగా విభజించారు మరియు అన్ని సమూహాలకు 400 ml PBSతో 1 x 107 U87 గ్లియోమా కణాలు మరియు గ్రోత్ ఫ్యాక్టర్ తగ్గిన BD Matrigel™ (BD సైన్స్, మయామి, FL, USA)తో సబ్‌కటానియస్‌గా ఇంజెక్ట్ చేయబడ్డాయి.కణితి ఇంజెక్షన్ తర్వాత ఆరు రోజుల తర్వాత, BV2 కణాల నుండి తీసుకోబడిన 200 mg ఎక్సోసోమ్‌లు (టాక్సోప్లాస్మా ఇన్‌ఫెక్షన్‌తో/లేకుండా) కణితి ప్రదేశంలోకి ఇంజెక్ట్ చేయబడ్డాయి.కణితి సంక్రమణ తర్వాత ఇరవై రెండు రోజుల తర్వాత, ప్రతి సమూహంలోని ఎలుకల కణితి పరిమాణాన్ని వారానికి మూడు సార్లు కాలిపర్‌తో కొలుస్తారు మరియు కణితి వాల్యూమ్ సూత్రం ద్వారా లెక్కించబడుతుంది: 0.5×(వెడల్పు)×2×పొడవు.
miRCURYTM LNA miRNA శ్రేణిని ఉపయోగించి మైక్రోఆర్ఎన్ఎ వ్యక్తీకరణ విశ్లేషణ, 7వ తరంలో mmu మరియు rno శ్రేణులు (EXIQON, Vedbaek, డెన్మార్క్) 3100 మానవ, ఎలుక మరియు ఎలుక miRNA క్యాప్చర్ ప్రోబ్స్‌లో 1119 బాగా-వర్ణించబడిన ఎలుకలను కవర్ చేస్తాయి.ఈ ప్రక్రియలో, 5′-ఫాస్ఫేట్ నుండి మొత్తం RNAలో 250 నుండి 1000 ng వరకు దూడ పేగు ఆల్కలీన్ ఫాస్ఫేటేస్‌తో చికిత్స చేయడం ద్వారా హై3 గ్రీన్ ఫ్లోరోసెంట్ డైతో లేబుల్ చేయడం ద్వారా తొలగించబడింది.హైబ్రిడైజేషన్ ఛాంబర్ కిట్ (ఎజిలెంట్ టెక్నాలజీస్, శాంటా క్లారా, CA, USA) మరియు హైబ్రిడైజేషన్ స్లయిడ్ కిట్ (ఎజిలెంట్ టెక్నాలజీస్) ఉపయోగించి మైక్రోఅరే స్లయిడ్‌లను లోడ్ చేయడం ద్వారా లేబుల్ చేయబడిన నమూనాలు హైబ్రిడైజ్ చేయబడ్డాయి.హైబ్రిడైజేషన్ 56 ° C వద్ద 16 గంటలు నిర్వహించబడింది, అప్పుడు తయారీదారు యొక్క సిఫార్సులకు అనుగుణంగా మైక్రోరేలు కడుగుతారు.ప్రాసెస్ చేయబడిన మైక్రోఅరే స్లయిడ్‌లు ఎజిలెంట్ G2565CA మైక్రోఅరే స్కానర్ సిస్టమ్ (ఎజిలెంట్ టెక్నాలజీస్) ఉపయోగించి స్కాన్ చేయబడ్డాయి.ఎజిలెంట్ ఫీచర్ ఎక్స్‌ట్రాక్షన్ సాఫ్ట్‌వేర్ వెర్షన్ 10.7.3.1 (ఎజిలెంట్ టెక్నాలజీస్) ఉపయోగించి స్కాన్ చేసిన చిత్రాలు దిగుమతి చేయబడ్డాయి మరియు సవరించిన Exiqon ప్రోటోకాల్ యొక్క సంబంధిత GAL ఫైల్‌ని ఉపయోగించి ప్రతి చిత్రం యొక్క ఫ్లోరోసెన్స్ తీవ్రత లెక్కించబడుతుంది.ప్రస్తుత అధ్యయనం కోసం మైక్రోఅరే డేటా యాక్సెషన్ నంబర్ GPL32397 క్రింద GEO డేటాబేస్‌లో నిక్షిప్తం చేయబడింది.
టాక్సోప్లాస్మా సోకిన RH లేదా ME49 జాతుల మైక్రోగ్లియాలోని పరిపక్వ ఎక్సోసోమల్ miRNA ల యొక్క వ్యక్తీకరణ ప్రొఫైల్‌లు వివిధ నెట్‌వర్క్ సాధనాలను ఉపయోగించి విశ్లేషించబడ్డాయి.కణితి అభివృద్ధికి సంబంధించిన miRNAలు miRWalk2.0 (http://mirwalk.umm.uni-heidelberg.de)ని ఉపయోగించి గుర్తించబడ్డాయి మరియు 8.0 కంటే ఎక్కువ సాధారణీకరించిన సిగ్నల్ తీవ్రత (లాగ్2)తో ఫిల్టర్ చేయబడ్డాయి.miRNAలలో, T. గోండి సోకిన RH లేదా ME49 జాతులచే మార్చబడిన miRNAల ఫిల్టర్ విశ్లేషణ ద్వారా విభిన్నంగా వ్యక్తీకరించబడిన miRNAలు 1.5 రెట్లు ఎక్కువ మార్చబడినట్లు కనుగొనబడింది.
లిపోఫెక్టమైన్ 2000 (ఇన్విట్రోజెన్, కార్ల్స్ బాడ్, CA, USA) ఉపయోగించి ఆప్టి-MEM (గిబ్కో, కార్ల్స్ బాడ్, CA, USA)లో ఆరు-బావి పలకలలో (3 x 105 కణాలు/బావి) కణాలు సీడ్ చేయబడ్డాయి.బదిలీ చేయబడిన కణాలు 6 గంటల పాటు కల్చర్ చేయబడ్డాయి మరియు తర్వాత మాధ్యమం తాజా పూర్తి మాధ్యమానికి మార్చబడింది.బదిలీ అయిన 24 గంటల తర్వాత కణాలు కోయబడ్డాయి.
గణాంక విశ్లేషణ ప్రధానంగా ఎక్సెల్ సాఫ్ట్‌వేర్ (మైక్రోసాఫ్ట్, వాషింగ్టన్, DC, USA)తో స్టూడెంట్స్ టి-టెస్ట్ ఉపయోగించి నిర్వహించబడింది.ప్రయోగాత్మక జంతు విశ్లేషణ కోసం, ప్రిజం 3.0 సాఫ్ట్‌వేర్ (గ్రాప్‌ప్యాడ్ సాఫ్ట్‌వేర్, లా జోల్లా, CA, USA) ఉపయోగించి రెండు-మార్గం ANOVA ప్రదర్శించబడింది. P-విలువలు <0.05 గణాంకపరంగా ముఖ్యమైనవిగా పరిగణించబడ్డాయి. P-విలువలు <0.05 గణాంకపరంగా ముఖ్యమైనవిగా పరిగణించబడ్డాయి. Значения P <0,05 считались статистически значимыми. P విలువలు <0.05 గణాంకపరంగా ముఖ్యమైనవిగా పరిగణించబడ్డాయి. P 值< 0.05 被认为具有统计学意义。 పి 值< 0.05 Значения P <0,05 считались статистически значимыми. P విలువలు <0.05 గణాంకపరంగా ముఖ్యమైనవిగా పరిగణించబడ్డాయి.
ఈ అధ్యయనంలో ఉపయోగించిన అన్ని ప్రయోగాత్మక ప్రోటోకాల్‌లు సియోల్ నేషనల్ యూనివర్శిటీ స్కూల్ ఆఫ్ మెడిసిన్ (IRB నంబర్ SNU-150715-2) యొక్క ఇన్‌స్టిట్యూషనల్ రివ్యూ బోర్డ్ ద్వారా ఆమోదించబడ్డాయి.
The data used in this study are available upon reasonable request from the first author (BK Jung; mulddang@snu.ac.kr). And the microarray data for the current study is deposited in the GEO database under registration number GPL32397.
ఫర్లే, J. మరియు ఇతరులు.2018లో అంచనా వేసిన ప్రపంచ క్యాన్సర్ సంభవం మరియు మరణాలు: GLOBOCAN మూలాలు మరియు పద్ధతులు.వివరణ.J. రక్ 144, 1941–1953 (2019).
రషీద్, S., రెహ్మాన్, K. & ఆకాష్, MS మెదడు కణితుల ప్రమాద కారకాలు మరియు వాటి చికిత్సా జోక్యాలపై అంతర్దృష్టి. రషీద్, S., రెహ్మాన్, K. & ఆకాష్, MS మెదడు కణితుల ప్రమాద కారకాలు మరియు వాటి చికిత్సా జోక్యాలపై అంతర్దృష్టి.రషీద్, S., రెహ్మాన్, K. మరియు ఆకాష్, MS A రిస్క్ ఫ్యాక్టర్స్ ఆఫ్ బ్రెయిన్ ట్యూమర్స్ మరియు మేజర్ థెరప్యూటిక్ ఇంటర్వెన్షన్స్. రషీద్, S., రెహ్మాన్, K. & ఆకాష్, MS 深入了解脑肿瘤的危险因素及其治疗干预措施。 రషీద్, S., రెహ్మాన్, K. & ఆకాష్, MS బ్రెయిన్ ట్యూమర్ ప్రమాద కారకాలు మరియు చికిత్సా జోక్యాల గురించి లోతైన అవగాహన.రషీద్, S., రెహ్మాన్, K. మరియు ఆకాష్, MS A రిస్క్ ఫ్యాక్టర్స్ ఆఫ్ బ్రెయిన్ ట్యూమర్స్ మరియు మేజర్ థెరప్యూటిక్ ఇంటర్వెన్షన్స్.బయోమెడికల్ సైన్స్.ఫార్మసిస్ట్.143, 112119 (2021).
కాటో, I., జాంగ్, J. & సన్, J. బాక్టీరియల్-వైరల్ ఇంటరాక్షన్స్ ఇన్ హ్యూమన్ ఒరోడైజెస్టివ్ మరియు ఫిమేల్ జననేంద్రియ ట్రాక్ట్ క్యాన్సర్: ఎపిడెమియోలాజిక్ మరియు లేబొరేటరీ సాక్ష్యం యొక్క సారాంశం. కాటో, I., జాంగ్, J. & సన్, J. బాక్టీరియల్-వైరల్ ఇంటరాక్షన్స్ ఇన్ హ్యూమన్ ఒరోడైజెస్టివ్ మరియు ఫిమేల్ జననేంద్రియ ట్రాక్ట్ క్యాన్సర్: ఎపిడెమియోలాజిక్ మరియు లేబొరేటరీ సాక్ష్యం యొక్క సారాంశం.కాటో I., జాంగ్ J. మరియు సన్ J. మానవ జీర్ణ వాహిక మరియు స్త్రీ జననేంద్రియ మార్గము యొక్క క్యాన్సర్‌లో బాక్టీరియల్-వైరల్ పరస్పర చర్యలు: ఎపిడెమియోలాజికల్ మరియు ప్రయోగశాల డేటా యొక్క సారాంశం. కటో, I., జాంగ్, J. & సన్, J. 人类口腔消化道癌和女性生殖道癌中的细菌-病毒相互作用︎ కాటో, I., జాంగ్, J. & సన్, J. మానవ నోటి కుహరం జీర్ణక్రియ మరియు స్త్రీ పునరుత్పత్తి మార్గంలో బాక్టీరియో-వైరల్ పరస్పర చర్య: ప్రముఖ వ్యాధి శాస్త్రం మరియు ప్రయోగశాల సాక్ష్యం యొక్క సారాంశం.కాటో I., జాంగ్ J. మరియు సన్ J. మానవ జీర్ణశయాంతర క్యాన్సర్ మరియు స్త్రీ జననేంద్రియ క్యాన్సర్‌లో బాక్టీరియల్-వైరల్ పరస్పర చర్యలు: ఎపిడెమియోలాజికల్ మరియు లేబొరేటరీ డేటా యొక్క సారాంశం.క్యాన్సర్ 14, 425 (2022).
మాగోన్, KL & పారిష్, JL ఇన్ఫెక్షన్ నుండి క్యాన్సర్ వరకు: DNA ట్యూమర్ వైరస్‌లు హోస్ట్ సెల్ సెంట్రల్ కార్బన్ మరియు లిపిడ్ జీవక్రియను ఎలా మారుస్తాయి. మాగోన్, KL & పారిష్, JL ఇన్ఫెక్షన్ నుండి క్యాన్సర్ వరకు: DNA ట్యూమర్ వైరస్‌లు హోస్ట్ సెల్ సెంట్రల్ కార్బన్ మరియు లిపిడ్ జీవక్రియను ఎలా మారుస్తాయి.మహోన్, KL మరియు పారిష్, JL ఫైర్ ఇన్ఫెక్షన్ టు క్యాన్సర్: DNA-ఆధారిత ట్యూమర్ వైరస్‌లు హోస్ట్ సెల్ సెంట్రల్ కార్బన్ మరియు లిపిడ్ జీవక్రియను ఎలా మారుస్తాయి. మాగోన్, KL & పారిష్, JL మాగోన్, KL & పారిష్, JL ఇన్ఫెక్షన్ నుండి క్యాన్సర్ వరకు: DNA ట్యూమర్ వైరస్లు హోస్ట్ సెల్ సెంట్రల్ కార్బన్ మరియు లిపిడ్ జీవక్రియను ఎలా మారుస్తాయి.మహోన్, KL మరియు పారిష్, JL ఫైర్స్ ఇన్ఫెక్షన్ టు క్యాన్సర్: DNA ట్యూమర్ వైరస్‌లు హోస్ట్ కణాలలో సెంట్రల్ కార్బన్ మరియు లిపిడ్ జీవక్రియను ఎలా మారుస్తాయి.ఓపెన్ బయాలజీ.11, 210004 (2021).
కొరియా డా కోస్టా, JM మరియు ఇతరులు.స్కిస్టోసోమ్స్ మరియు లివర్ ఫ్లూక్స్ మరియు హెల్మిన్త్-అసోసియేటెడ్ క్యాన్సర్ యొక్క కాటెకోల్ ఈస్ట్రోజెన్.ముందు.లోపల వేడి.5, 444 (2014).